汉麻蛋白源胰脂肪酶抑制肽的制备、结构表征及活性筛选OA

本研究旨在利用生物酶解技术提升汉麻蛋白资源的利用率及产品附加值,制备具有胰脂肪酶(pancreatic lipase,PL)抑制活性的功能肽。基于对比不同蛋白酶的水解效果筛选最优酶,采用Box-Behnken响应面法优化酶解工艺;综合运用分子量分布测定、扫描电镜观察、紫外光谱、傅里叶变换红外光谱、圆二色光谱及氨基酸组成分析,解析酶解前后蛋白的结构特征变化;利用LC-MS/MS鉴定多肽序列,并结合分子对接技术筛选潜在的活性肽。结果表明,最优酶解条件为:木瓜蛋白酶与底物比(E/S,w/w)4.3%、温度62℃、pH6.1。此条件下,酶解物的PL抑制率达57.06%±1.64%,IC50值为5.12±0.31 mg/mL。水解产物呈现不规则无定形微观结构,平均分子量降低且1~3 kDa多肽占比升高;酶解过程导致蛋白的β-折叠比例显著降低,α-螺旋、β-转角比例显著增加,甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸及精氨酸等氨基酸的含量也发生显著变化;经鉴定,酶解产物中共有1195条多肽,从中筛选出相对含量大于1%且PeptideRanker得分≥0.6的候选多肽15条(序列:FEW、LLFSP、LAF、LLF、FYL、LSF、VLF、LLSF、LFL、LFY、LVF、LFR、LFF、LLLF、FLF),其累计相对含量达28.79%;分子对接显示,上述多肽与PL的对接结合能介于-7.4~-10.0 kcal/mol,显示出较强的PL抑制潜力。综上,本研究证实木瓜蛋白酶可高效制备汉麻蛋白源PL抑制肽,同时酶解过程能显著改变蛋白结构。优化的酶解条件及鉴定出的15种潜在活性肽,为汉麻蛋白在肥胖干预功能食品中的高值化开发及工业化应用提供了理论与技术依据。