基于生物合成途径的Holoferritin高效制备工艺优化及其结构表征OA

Holoferritin富含丰富的铁元素,被认为是优良的潜在补铁因子,然而,其制备过程存在工艺繁杂、损失率高等问题,该研究基于铁离子胁迫诱导微生物细胞生物合成Holoferritin体系,优化并建立了Holoferritin高效制备的工艺,并探讨该工艺对Holoferritin结构、性质的影响。琼脂糖凝胶电泳、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,0.005%核酸酶处理即可有效去除宿主核酸残留,联合加热处理和硫酸铵沉淀处理,即可高效制备高纯度Holoferritin。通过紫外光谱、圆二色谱、傅里叶变换红外光谱、马尔文粒度仪、透射电子显微镜等方法表征Holoferritin的结构,发现该纯化工艺能够维持Holoferritin天然的铁蛋白纳米笼-铁芯完整构象和典型的α-螺旋二级结构。此外,该工艺能够在保证Holoferritin结构完整性的前提下,将蛋白纯化周期由72 h缩短至48 h,为Holoferritin的规模化制备和其在生物医药、食品等领域的应用提供了可靠的技术支撑。