蒙古冰草种子诱导再生体系的建立及农杆菌介导遗传转化研究OA

蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)是一种多年生二倍体禾本科(Poaceae)牧草。因缺乏高效、稳定的再生体系和遗传转化体系,研究其基因功能大多借助拟南芥、烟草或水稻完成,所以建立高效、稳定的蒙古冰草再生体系和遗传转化体系尤为重要。而胚性愈伤的诱导是再生体系建立的关键,稳定遗传转化体系建立的关键是对侵染液最佳浓度和侵染时间的确定。本研究以蒙古冰草种子作为诱导材料,研究了胚性愈伤诱导最适2,4-D浓度及胚性愈伤率;以农杆菌介导法侵染胚性愈伤组织,通过GUS染色研究蒙古冰草的遗传转化侵染条件,发现蒙古冰草种子诱导愈伤,2,4-D浓度为1.0 mg·L^(-1)和3.0 mg·L^(-1)时,出愈率分别为38.33%和58.33%,而2,4-D浓度为2.0 mg·L^(-1)时,出愈率为81.66%,表明诱导愈伤最适2,4-D浓度为2.0 mg·L^(-1);通过2批次种子诱导愈伤的胚性愈伤率分别为52%和50.5%。农杆菌侵染胚性愈伤及GUS染色结果表明最适侵染液OD600值为0.5,最适侵染时间为5 min,GUS染色阳性率为87.27%。这为蒙古冰草快速、稳定繁殖及基因功能验证奠定重要基础。