基于网络药理学和动物实验探讨肾衰1号方灌肠治疗慢性肾脏病的作用机制OA

目的:基于网络药理学、分子对接技术和动物实验探讨肾衰1号方灌肠治疗慢性肾脏病(CKD)的作用机制。方法:通过TCMSP、HERB、BATMAN、TCMID数据库筛选有效活性成分;利用GeneCards、OMIM、DisGeNET、CTD数据库筛选CKD疾病靶点;交集分析获得共同作用靶点,构建“成分-靶点”网络和蛋白互作(PPI)网络,并进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。使用AutoDock Vina进行药物成分与疾病靶点的分子对接验证。动物实验中,使用40 mg/(kg·d)的腺嘌呤灌胃诱导小鼠CKD模型,设置正常对照组(CTL)、慢性肾脏病模型组(CKD)和肾衰1号方灌肠组(SSY)。采用全自动生化分析仪检测肾功能;采用肾组织病理染色评估肾脏病理改变;采用蛋白质印迹法检测肾脏组织中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路关键蛋白的表达水平。结果:筛选出肾衰1号方治疗CKD的潜在靶点212个。筛选出主要活性成分为槲皮素、木犀草素、汉黄芩素等。经PPI网络分析筛选得到核心靶点为肿瘤蛋白p53(TP53)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、蛋白激酶B1(AKT1)、SRC原癌基因非受体酪氨酸激酶(SRC)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)。KEGG富集分析提示PI3K/AKT信号通路是潜在作用通路。分子对接验证表明槲皮素、木犀草素、汉黄芩素可与AKT1、PIK3CA两种蛋白活性口袋稳定结合。动物实验结果显示,肾衰1号方能降低CKD小鼠血清肌酐(SCr)及血尿素氮(BUN)水平,下调肾组织中纤维化相关蛋白CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、Vimentin的表达。进一步机制研究表明肾衰1号方能抑制CKD小鼠肾组织中PI3K和AKT的磷酸化水平,降低p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值。结论:肾衰1号方可能通过抑制PI3K/AKT通路过度活化减轻肾脏纤维化,从而治疗CKD。