基于TGF-β1/Smads通路探究芪丹肾络方抑制糖尿病肾病足细胞EMT的作用机制OA

目的探讨芪丹肾络方(QDSL)是否通过调控转化生长因子-β1/果蝇母源抗同源物蛋白(TGF-β1/Smads)通路抑制足细胞上皮-间充质转化(EMT),从而改善糖尿病肾病(DKD)大鼠的足细胞损伤和肾小球硬化。方法采用高脂饲养联合链脲佐菌素腹腔注射诱导SD大鼠DKD模型。成模大鼠按体质量随机分为模型(Model)组、芪丹肾络方高剂量(QDSL-H)组、芪丹肾络方低剂量(QDSL-L)组及罗格列酮(Rosi)组,另设正常(Control)组。连续灌胃给药6周后,检测血糖、尿白蛋白与肌酐的比值(UACR)、肾功能及血脂;采用免疫组化、Western blot、RT-qPCR检测肾皮质EMT相关标志物(E-cadherin、nephrin、Col-Ⅰ、desmin)及TGF-β1/Smads通路蛋白表达;透射电子显微镜(TEM)观察足突形态与肾小球基底膜(GBM)变化;苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸-雪夫染色(PAS)和马松(Masson)染色评估肾组织病理改变。结果表型上,与Model组相比,QDSL各剂量组及Rosi组均能显著降低血糖(P<0.001)、UACR(P<0.001)、肾重比(KWR,P<0.05,P<0.01)及改善肾功能(P<0.05,P<0.01,P<0.001)与血脂(P<0.05,P<0.01,P<0.001),并减轻肾小球硬化(P<0.01,P<0.001)、足突融合(P<0.001)及基底膜增厚(P<0.05),上述检测指标各给药组间差异无统计学意义(P>0.05)。机制上,QDSL可上调E-cadherin与nephrin表达,下调Col-Ⅰ与desmin表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001),并抑制TGF-β1、p-Smad2/3水平(P<0.01,P<0.001),促进Smad7表达(P<0.05,P<0.01)。虽然各给药组间EMT标志物的调节和TGF-β1/Smads通路的调控趋势一致,但QDSL-H组对TGF-β1/Smads通路的调控作用优于QDSL-L组和Rosi组(P<0.05),QDSL-H组和Rosi组对足细胞EMT基因转录水平的调控作用优于QDSL-L组(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论QDSL可能通过调控TGF-β1/Smads信号通路,抑制足细胞EMT,减轻肾小球损伤,从而延缓DKD进展,为该方治疗DKD提供了实验依据。