朝藿定B靶向细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制胆管癌细胞增殖的机制研究OA

目的:探究朝藿定B靶向细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)诱发细胞周期阻滞及抑制胆管癌细胞增殖的分子机制。方法:利用网络药理学分析筛选朝藿定B的靶基因,在胆管癌细胞系HUCC-T1和HCCC-9810中加入朝藿定B干预,通过CCK-8法检测其对细胞抑制率和细胞增殖活力的影响。通过流式细胞术观察朝藿定B对细胞周期的影响和细胞凋亡的诱导作用。采用蛋白免疫印迹实验检测相关分子通路中重要蛋白分子的表达及磷酸化修饰变化。在体外实验中应用免疫共沉淀实验验证朝藿定B与靶蛋白结合后对于蛋白复合物形成能力的竞争性抑制作用。结果:网络药理学分析预测并提示CDK2是朝藿定B的重要作用靶点之一,采用0、10、20、40、80和160μmol/L的朝藿定B处理两种胆管癌细胞系后,随药物浓度的升高,其对胆管癌细胞的抑制作用也随之增强。较低浓度(40μmol/L)的朝藿定B可以显著降低两种细胞的增殖活性,从而诱导细胞发生周期阻滞和细胞凋亡。蛋白免疫印迹实验验证发现朝藿定B通过靶向CDK2来抑制其与Cyclin E的结合,进而降低CDK2/Cyclin E复合物对底物(MCM2、P27、Rb)的激酶活性,最终导致S期阻滞的发生。体外实验验证显示5μmol/L的低浓度朝藿定B就可以有效抑制CDK2与Cyclin E的结合。结论:朝藿定B可通过作用于CDK2从而抑制CDK2/Cyclin E复合物的形成,进而诱发胆管癌细胞周期阻滞并最终导致细胞凋亡的发生。