猪源副干酪乳酪杆菌27-2高效表达调控元件的筛选与功能验证OA
本研究旨在利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选猪源副干酪乳酪杆菌(L.paracasei)27-2基因组中高效表达调控元件。以荧光素酶(Luciferase)为报告基因,构建重组乳酸菌表达载体系统,通过Luciferase活性检测、实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot定量分析来验证调控元件的启动效率。结果表明:猪源L.paracasei 27-2菌液上清经LC-MS/MS鉴定后,通过Uniprot数据库确定分泌量前3位蛋白分别为TolA家族蛋白、细胞外溶质结合蛋白家族5和肽聚糖水解酶,其对应的上游调控元件分别命名为N1、N2、N3。重组菌pPG-N1-Luciferase/27-2、pPG-N2-Luciferase/27-2、pPG-N3-Luciferase/27-2均能成功表达Luciferase蛋白。重组菌pPG-N1-Luciferase/27-2在上清和沉淀中的Luciferase活性、mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均极显著高于重组菌pPG-N2-Luciferase/27-2和pPG-N3-Luciferase/27-2(P<0.01),即3种调控元件驱动Luciferase蛋白表达的强度顺序为N1>N2>N3。综上所述,本研究从L.paracasei 27-2基因组中筛选获得的N1调控元件具有高效启动活性,基于该元件构建的重组菌表达系统可提升外源蛋白表达效率,为开发适配动物肠道环境的高效乳酸菌活菌载体系统、推动其在动物营养强化及疫病防控中的应用提供了关键理论依据。
杨义杰;尹方洁;郭怡婷;贾烁;马莹莹;赵洪哲;崔文;姜艳平;唐丽杰;李佳璇;李一经;王晓娜
东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030 动物疾病防控技术与制剂创制省重点实验室,哈尔滨150030
农业科技
猪源副干酪乳酪杆菌高效表达调控元件荧光素酶报告基因乳酸菌活菌载体
《动物营养学报》 2026 (9)
P.7090-7101,12
国家自然科学基金(32573406)。
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