基于Src/PI3K/Akt信号通路研究嘛呢骨痹方调控破骨细胞凋亡抑制类风湿关节炎骨破坏的作用机制OA

目的:基于Src/PI3K/Akt信号通路探索不同浓度嘛呢骨痹方调控类风湿关节炎(RA)破骨细胞(OC)凋亡抑制骨破坏的作用机制。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(1 mg/kg)阳性对照组和嘛呢骨痹方高(20.6 g/kg)、中(10.3 g/kg)、低(5.2 g/kg)剂量组,每组10只。灌胃给药,嘛呢骨痹方各组大鼠每天1次,甲氨蝶呤组大鼠每3天1次,干预28 d。计算大鼠造模后踝关节肿胀程度并评价关节炎症指数,HE染色观察踝关节、滑膜及软骨的病理变化;TRAR染色观察踝关节骨组织中OC数量;ELISA检测血清IL-1β、TNF-α、IL-10、IL-6水平;免疫组化检测关节滑膜组织中Bcl-2、Bax、Caspase-1蛋白表达,Real time PCR检测关节滑膜组织中Src、PI3K、Akt mRNA表达,Western Blot检测关节骨膜组织p-Akt、Akt、PI3K、p-PI3K、Src蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠关节炎症状和体征明显,关节软骨表面粗糙、滑膜细胞增多且排列紊乱,踝关节直径和血清IL-1β、IL-10、IL-6、TNF-α水平显著升高,血清IL-10水平显著降低,踝关节骨组织中OC数量显著增多,滑膜组织Src、PI3K、Akt mRNA和Bax、Caspase-1、p-Akt、p-PI3K、Src蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠关节炎症状、体征和组织病理学明显改善,除嘛呢骨痹方低剂量组滑膜组织Bax蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)外,各给药组大鼠踝关节直径和血清IL-1β、IL-10、IL-6、TNF-α水平显著降低,血清IL-10水平显著升高,踝关节骨组织中OC数量显著减少,滑膜组织Src、PI3K、Akt mRNA和Bax、Caspase-1、p-Akt、Akt、PI3K、p-PI3K、Src蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:不同浓度的嘛呢骨痹方均能抑制OC的分化,促进OC过度凋亡,提高Bax/Bcl-2的比值以及促凋亡蛋白的表达,其中,以高浓度嘛呢骨痹方的作用最佳;经高浓度嘛呢骨痹方的干预,显著抑制了Src/PI3K/Akt通路相关蛋白AKT蛋白的磷酸化,显著升高OC总凋亡率,减少细胞因子的释放,从而减轻炎症反应,延缓骨破坏的进展,发挥防治RA的作用。