基于流式细胞仪鉴定北沙柳倍性方法的建立及倍性育种初探OA

为建立适于北沙柳染色体组倍性分析的流式细胞检测体系及探究秋水仙素处理对北沙柳种子的倍性诱导效果,以已知四倍体北沙柳优良无性系的嫩叶为试验材料,解析不同解离液、离心方式、滤网孔径大小以及样品保存方式对流式细胞检测结果的影响;使用不同浓度和时间的秋水仙素对北沙柳种子进行浸泡,探究秋水仙素浓度、浸泡时间对北沙柳种子诱变的影响,统计其发芽率,并通过形态学鉴定、气孔特征分析、叶片解剖结构分析和流式细胞检测对诱变子代株系进行鉴定分析。结果表明,使用mGb解离液解离10 min后经300目滤网过滤,以1000 r/min的转速4℃离心6 min,再经PI染色10 min后上机检测的效果较适宜,且-80℃冷冻保存北沙柳叶片的测定效果较好。采用上述体系检测30份北沙柳无性系,均为四倍体,且变异系数为3.58%~5.48%;在使用秋水仙素处理北沙柳种子时,其发芽率随秋水仙素浓度和时间的增加而降低,在浓度为0.2%、时间为24 h处理下,经流式细胞术检测发现染色体组加倍的嵌合体株系,其叶片长、宽、叶背气孔、叶片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、栅栏组织、海绵组织厚度及维管束面积均显著增大且叶片呈现皱缩。