衰老肿瘤细胞来源外泌体PKM2促进CD8+T细胞功能的机制研究OA

目的:探究衰老肿瘤细胞来源外泌体中影响CD8+T细胞抗肿瘤效应的关键分子及其作用机制,为提高免疫细胞治疗实体瘤疗效提供支持。方法:采用阿霉素诱导体内外衰老肿瘤细胞模型,流式细胞术及Western blot检测衰老相关标志物表达;将衰老肿瘤细胞上清与CD8+T细胞共孵育,检测耗竭分子表达及促炎细胞因子分泌;超速离心法分离纯化衰老肿瘤细胞来源外泌体,转录组学测序分析与外泌体共孵育的CD8+T细胞差异表达基因与富集的通路;进一步采用外泌体蛋白质组学测序、酶活性检测、Western blot及免疫荧光实验等分析衰老肿瘤细胞来源外泌体中四聚体丙酮酸激酶M2(tet-PKM2)对CD8+T细胞功能的影响。结果:阿霉素能够诱导肺癌细胞SA-β-Gal、p53和p21等衰老相关标志物表达显著上调。衰老肿瘤细胞上清及外泌体可显著增强CD8+T细胞促炎细胞因子(如IFN-γ、IL-2与Granzyme B)分泌能力,并降低耗竭分子(PD-1、TIM-3与LAG-3)表达。同时,在阿霉素诱导的体内肺癌衰老模型中,肿瘤浸润的CD8+T细胞功能显著增强。进一步机制研究显示,衰老肿瘤细胞来源外泌体上调CD8+T细胞效应相关基因表达并激活JAK3-STAT5信号通路。此外,衰老肿瘤细胞来源外泌体的差异蛋白显著富集于碳代谢通路,其中外泌体递送的tet-PKM2显著促进CD8+T细胞功能。结论:阿霉素诱导的衰老肿瘤细胞来源外泌体可通过激活JAK3-STAT5信号通路及递送tet-PKM2增强CD8+T细胞功能。