日本结缕草‘Zenith’胚性愈伤组织诱导与继代体系优化OA

为解决日本结缕草组织培养中存在的胚性愈伤组织诱导率低及继代褐化严重等技术瓶颈,本研究以其种播品种‘Zenith’的成熟种子为外植体,旨在建立一套高效、稳定的植株再生体系。研究以Murashige&Skoog(MS)培养基辅以2 mg·L^(-1)2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和0.2 mg·L^(-1)6-苄氨基嘌呤(6-BA)作为基础诱导培养基(IM),通过3轮递进式的单因素试验筛选关键调控因子。第1轮初筛发现,5 mg·L^(-1)维生素B_(1)(VB_(1))和25 mg·L^(-1)α-酮戊二酸具有促进效应,但胚性愈伤诱导率最高仅为6.74%。第2轮筛选明确了2 mg·L^(-1)麦草畏(dicamba)是核心调控激素,可将胚性愈伤诱导率显著提升至19.65%。第3轮在“IM+2 mg·L^(-1)麦草畏”的基础上进行优化,证实额外添加25mg·L^(-1)的α-酮戊二酸可使胚性愈伤的诱导效率再提升62.38%。针对继代培养难题,在培养基中添加0.05 mg·L^(-1)脱落酸(ABA)可有效抑制愈伤组织的早熟分化;抗褐化筛选则表明,4 g·L^(-1)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、0.5~1.0g·L^(-1)活性炭(AC)以及0.001~0.005 g·L^(-1)硝酸银(AgNO3)均能显著降低愈伤褐化率,其中PVP的效果最佳。本研究最终建立了一套完整的日本结缕草高效再生体系,为基因编辑、遗传转化等分子育种工作提供了稳定的受体系统,同时为其他暖季型草坪草的再生体系构建提供了重要的理论与技术参考。