血必净注射液通过上调磷脂转运蛋白调控巨噬细胞JNK/c-JUN通路改善脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征OA

目的探讨血必净对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型的保护作用及其分子机制。方法体内实验:C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS模型组、LPS+低剂量血必净注射液组(LPS+LXBJ)和LPS+高剂量血必净注射液组(LPS+HXBJ)(n=15)。检测生存率、肺组织病理(HE染色、肺损伤评分、湿/干质量比)、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)]水平、磷脂转运蛋白(PLTP)表达(转录组测序、实时荧光定量PCR、Western blotting、酶联免疫吸附试验、免疫荧光)。体外实验:RAW264.7巨噬细胞给予LPS与不同浓度血必净处理,检测细胞活力、形态、炎症因子及PLTP表达,并利用过表达PLTP验证其功能。信号通路:检测JNK/c-JUN和NF-κB通路蛋白表达。结果与LPS组相比,血必净治疗(尤其是高剂量组)提高脓毒症ARDS小鼠的4 d生存率(P<0.05),降低肺组织病理学损伤评分(P<0.001)和湿/干质量比(P<0.001)。血必净降低了血清及肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平:在血清中,低剂量血必净即可降低上述指标(P<0.05),高剂量血必净作用更为显著;在肺泡灌洗液中,低、高剂量血必净均可降低IL-1β水平(P<0.05),高剂量血必净降低TNF-α、IL-6(P<0.05)水平,而低剂量血必净的作用未达到统计学意义(P>0.05)。转录组测序及实验验证显示,LPS下调肺组织PLTP表达(P<0.001),而血必净干预可逆转该趋势(P<0.05)。体外实验显示,血必净呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子释放(P<0.05),并上调PLTP表达。机制研究显示,血必净通过上调PLTP,抑制了JNK/c-JUN和NF-κB信号通路的磷酸化激活(P<0.05),而过表达PLTP则增强其效果(P<0.05)。结论血必净通过上调PLTP表达,抑制JNK/c-JUN和NF-κB信号通路,减轻脓毒症相关ARDS的炎症反应与组织损伤,提示PLTP可能为其作用的关键靶点。