人轮状病毒VP8^(*)蛋白多克隆抗体制备及其抗病毒功能研究OA

目的:通过杆状病毒表达系统分泌表达可溶性重组VP8^(*)蛋白,纯化的蛋白用于制备特异性多克隆抗体并验证其抗病毒活性。方法:构建重组质粒pYBDM-IM-GP67-VP8^(*),转座后进行蓝白斑筛选、PCR验证,将重组菌液直接感染sf 9细胞获得重组杆状病毒Am-pYBDM-IM-GP67-VP8^(*)。利用该重组杆状病毒分泌表达VP8^(*)蛋白,Western blot验证其正确性。纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体血清;ELISA测定抗体效价,Western blot验证抗体与天然人轮状病毒(hRV)粒子及重组VP8^(*)蛋白的结合特异性。病毒中和试验评估抗体的体外抗病毒活性。结果:酶切及测序证实pYBDM-IM-GP67-VP8^(*)重组质粒构建成功,携带信号肽的VP8^(*)重组杆状病毒感染sf 9细胞后,蛋白以分泌形式高效表达,Western blot验证为携带His tag的目标蛋白;经免疫程序成功制备小鼠抗hRV VP8^(*)蛋白的多克隆抗体,ELISA检测效价达1∶128000;病毒中和试验表明,该多克隆抗体在1∶64稀释倍数范围内可有效阻断hRV对宿主细胞的感染,具有明确的体外病毒中和活性。结论:成功利用改进的昆虫杆状病毒细胞表达系统获得具有免疫活性的重组hRV VP8^(*)蛋白,制备的多克隆抗体具备优异的反应原性与特异性,且有明确的体外病毒中和能力,不仅为hRV VP8^(*)蛋白结构功能研究、病毒入侵机制解析提供了关键工具,更为该病毒亚单位疫苗研发及抗体药物开发奠定了重要物质基础与技术支撑。