肺瘤消积方调控肿瘤相关巨噬细胞SYK/FcγR信号通路抑制非小细胞肺癌OA

目的:借助网络药理学和生物信息学方法筛选肺瘤消积方干预非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的潜在作用靶点及关键信号通路,并通过体外细胞实验验证其通过调控肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)内SYK/FcγR信号通路,抑制NSCLC进展的机制。方法:(1)网络药理学与生物信息学分析:通过TCMSP数据库筛选肺瘤消积方所含中药的活性成分,结合DrugBank数据库获得其作用靶点;从GEO数据库下载NSCLC数据集GSE18842,采用DESeq2 R包筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),将药物靶点与DEGs取交集后进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。(2)体外实验验证:将人单核巨噬细胞(THP-1)与人NSCLC细胞(A549)非接触式共培养,建立体外NSCLC微环境模型。将共培养细胞分为对照组(NC组)、肺瘤消积方组、NC+HSF1抑制剂组、肺瘤消积方+HSF1抑制剂组。采用Western blot检测各组THP-1细胞中P22、P47、HSF1、PU.1、SYK、Dectin-1、FCγRI蛋白表达水平,免疫荧光染色法检测HSF1、PU.1相对荧光强度,荧光微球吞噬实验检测THP-1细胞的吞噬能力。结果:(1)网络药理学与生物信息学分析共筛选出肺瘤消积方25个活性成分、22个潜在靶点,GSE18842数据集共获得21655个DEGs,药物-疾病共有交集靶点6个;KEGG通路富集分析显示交集靶点显著富集于Fc epsilon RI、NF-κB、B细胞受体、FcγR介导的吞噬等信号通路。(2)体外实验:与NC组比较,NC+HSF1抑制剂组细胞HSF1、PU.1、SYK、Dectin-1、FCγRI蛋白表达水平降低(P<0.05),HSF1、PU.1相对荧光强度降低(P<0.01),荧光微球数量减少(P<0.01)。与肺瘤消积方组比较,肺瘤消积方+HSF1抑制剂组细胞HSF1、PU.1、SYK、Dectin-1、FCγRI蛋白表达水平降低(P<0.01),HSF1、PU.1相对荧光强度降低(P<0.01),荧光微球数量减少(P<0.01)。结论:肺瘤消积方可能通过促进TAMs内SYK/FcγR介导的对NSCLC细胞的吞噬作用抑制肿瘤进展。