鸡马立克氏病病毒1型特异性单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立与应用OA

为获取鸡马立克氏病病毒1型(Marek′s disease virus type 1,MDV-1)的单克隆抗体,建立MDV-1的间接免疫荧光检测方法并进行初步应用,通过原核表达系统表达MDV-1 PP38蛋白,将其纯化后免疫Balb/c小鼠,基于杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体,对其进行特异性、分泌抗体亚类和Western blot鉴定,用单抗建立间接荧光抗体试验(indirect fluorescence antibody assay,IFA)并应用于活疫苗中的MDV-1外源病毒检测和蚀斑计数等。结果显示,该杂交瘤细胞株亚型为IgG1型,轻链为Kappa,Western blot和IFA试验与MDV-1的反应性良好;IFA最佳条件为37℃单抗1∶500稀释孵育1 h,FITC-山羊抗鼠IgG 1∶200稀释孵育1 h;IFA方法检测活疫苗中的MDV-1外源病毒,蚀斑计数优于传统方法,可有效识别MDV-1组分及疫苗中是否非法添加MDV-1。研究结果为后续研发MDV-1的检测试剂盒及MDV-1的生物学特性研究奠定了基础。