草原红牛NGF基因克隆及在骨骼肌卫星细胞成肌分化中的表达OA

为探究神经生长因子(NGF)的基因功能,明确其在草原红牛不同组织中的表达及其对牛骨骼肌卫星细胞(bSMSCs)成肌分化的影响,采集草原红牛各组织,克隆并获得NGF基因完整CDS区,并进行生物信息学及组织表达分析。从新生牛犊后肢的深层组织中分离bSMSCs,免疫荧光染色检测bSMSCs特异性标志物Pax7,Desmin和MyoD1的表达,并利用血清撤离法在体外使用2%的马血清诱导bSMSCs成肌分化,并检测了在分化的不同时期NGF基因mRNA和蛋白的表达规律。结果表明,草原红牛NGF基因CDS区长度为726 bp,编码241个氨基酸;其氨基酸序列与家鼠、红鹿及绵羊位于一个分支,同源性较高,亲缘关系较近。NGF蛋白分子质量约为26.67 ku,分子式为C_(1179)H_(1861)N_(349)O_(339)S_(10),理论等电点为9.72,半衰期为30 h,NGF蛋白为水溶性蛋白;NGF蛋白存在信号肽,是分泌蛋白;共存在42个潜在的磷酸化位点及3个N-糖基化位点。NGF蛋白二级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成,并与三级结构预测结果一致。NGF基因在草原红牛不同组织中的表达量存在显著差异,在肝脏中最高,其次为肾脏和瘤。NGF基因在bSMSCs成肌分化过程中的表达是持续上调的,并在分化第7天呈显著性差异表达。成功克隆草原红牛NGF基因CDS区,并建立了NGF基因的组织表达谱,明确了NGF基因在bSMSCs成肌分化过程中的表达规律。