副结核分枝杆菌MAP1197蛋白原核表达及ELISA法的建立OA
目的建立羊副结核病间接ELISA检测方法。方法基于MAP1197基因,设计引物、PCR扩增、构建原核表达载体、转化大肠杆菌;MAP1197蛋白诱导表达、鉴定,评估免疫原性和反应原性;包被MAP1197蛋白,摸索条件建立间接ELISA法,与2个商品化试剂盒同时检测不同强度MAP阳性血清、野外采集466份羊血清和人工感染动物试验112份羊血清,并进行比较。结果成功扩增MAP1197基因并构建原核表达载体,诱导获得约34.2 kDa的重组蛋白,并能被MAP阳性血清和兔多克隆抗体识别;建立的ELISA最优条件为抗原包被量500 ng/孔、待检血清稀释倍数1∶200、37℃包被3 h、2%BSA封闭90 min、一抗孵育60 min、二抗1∶10000稀释并孵育45 min、TMB显色10 min;本研究ELISA法、ID vet和IDEXX试剂盒对不同强度MAP阳性血清检测结果不一致,对野外466份羊血清检测的阳性率分别为41.85%、6.22%和3.43%,人工感染试验组84份血清的阳性率分别为46.43%、10.71%和8.33%。结论本研究初步建立了检测副结核分枝杆菌抗体的ELISA法,为诊断和防制羊副结核病奠定了基础。
张荣;薛仕元;杨波;斯琴图娜拉;李宏;曹芳;陈瑞斌;哈斯巴雅尔;阿拉腾巴根;吉雅图;马薇;吕月融;丁玉林;王瑞;赵丽;李梦园;刘永宏
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医药卫生
副结核分枝杆菌MAP1197蛋白原核表达ELISA
《中国人兽共患病学报》 2026 (8)
P.853-859,7
鄂尔多斯市重点研发计划项目(No.YF20240007)科研创新团队建设专项B类团队(No.BR251303)内蒙古农业大学高层次人才科研启动金项目(No.NDYB2018-5)。
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