含PxIxIT模序KpsF基因:潜在的烟曲霉钙调磷酸酶内源性抑制剂OA

目的探究烟曲霉中KpsF基因与钙调磷酸酶(Calcineurin,CaN)的相互作用关系。方法利用激光共聚焦显微镜观察他克莫司(Tacrolimus,FK506)抑制钙调磷酸酶后KpsF绿色荧光强度的变化、应用实时荧光定量PCR技术分析抑制钙调磷酸酶对烟曲霉KpsF基因表达量的影响以及采用分子对接与分子动力学模拟,从生物信息学角度预测二者在蛋白质层面的相互作用关系。结果激光共聚焦显微镜观察显示,相比空白对照组,经10 mmol/L Ca^(2+)处理后,KpsF荧光未出现显著变化;而当使用FK506抑制钙调磷酸酶催化亚基A(Calcineurin A,CnaA)活性后,KpsF荧光明显增强;在Ca^(2+)与FK506共同存在时,KpsF荧光进一步增强。实时荧光定量PCR结果显示,在上述处理条件下,KpsF与CnaA基因表达均呈现与荧光强度变化相同趋势。分子对接及分子动力学模拟结果显示,CnaA与KpsF之间形成10个氢键,结合能为-8.4 kcal/mol,蛋白复合物稳定。结论KpsF基因可能作为烟曲霉钙调磷酸酶的内源性抑制剂发挥作用。