芪蒡糖肾方通过AMPK/SIRT3信号通路调控NLRP3炎症小体改善糖尿病肾病肾损伤的机制研究OA

目的:基于AMPK/SIRT3信号通路探讨芪蒡糖肾方对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)小鼠与HK2细胞的NLRP3炎症小体的改善作用。方法:(1)体内实验:60只C57BL/6J小鼠随机选取10只作为对照(CON)组,其余成功构建DKD模型后分为模型(DKD)组、芪蒡糖肾方低剂量(QBTSF-L)组、芪蒡糖肾方中剂量(QBTSF-M)组、芪蒡糖肾方高剂量(QBTSF-H)组、达格列净(DAPA)组,连续灌胃给药治疗12周。实验结束后,收集小鼠肾脏H&E、PAS、Masson染色观察肾组织形态学变化;透射电子显微镜观察肾组织超微结构变化;免疫组化检测NLRP3表达水平;Western blot检测肾组织SIRT3、AMPK、P-AMPK、NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平;ELISA检测小鼠血清IL-1β、IL-18含量。(2)体外实验:体外采用高糖刺激HK2细胞,将其分为正常(NG,5.6 mmol/L glucose)组、高糖(HG,30 mmol/L glucose)组、芪蒡糖肾方(QBTSF,30 mmol/L glucose+2 mg/mL QBTSF)组、达格列净(DAPA,30 mol/L glucose+20μmol/L DAPA)组。Western blot检测细胞内SIRT3、AMPK、P-AMPK、NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平;免疫荧光检测SIRT3、NLRP3荧光强度。结果:(1)体内实验:与CON组相比,DKD组小鼠肾脏系膜细胞和基质增多,胶原纤维沉积明显增加,肾小球体积扩大,线粒体脊断裂,边界模糊;IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1、ASC含量明显升高,SIRT3、P-AMPK/AMPK含量明显降低(P<0.01)。与DKD组相比,芪蒡糖肾方干预后,上述病理损伤得到明显改善,IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1、ASC含量明显降低,SIRT3、P-AMPK/AMPK含量升高(P<0.05)。(2)体外实验:与NG组相比,HG组NLRP3、Caspase-1、ASC含量明显升高,SIRT3、P-AMPK/AMPK含量明显降低(P<0.01);与HG组相比,QBTSF组NLRP3、Caspase-1、ASC含量明显降低,SIRT3、P-AMPK/AMPK含量明显升高(P<0.01)。结论:芪蒡糖肾方可以有效抑制DKD中NLRP3炎症小体生成,其保护作用可能与调节AMPK/SIRT3信号通路相关蛋白表达有关。