猪伪狂犬病病毒US9蛋白多克隆抗体制备及其应用OA

为获得猪伪狂犬病病毒(pseudorabiesvirus,PRV)US9重组蛋白,并制备能够识别US9蛋白的特异性多克隆抗体,根据PRVHeNLH/2017株US9基因序列设计引物,扩增US9基因并克隆至原核表达载体pET-30a(+)。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),在不同温度下进行诱导表达。随后利用Ni-NTA亲和层析纯化重组US9蛋白,以此为免疫原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并通过SDS-PAGE、Westernblot和间接ELISA分析重组蛋白表达效果及抗体特性。结果表明,构建了pET-30a-US9重组质粒,并确定了其最佳诱导表达条件为1mmol/L IPTG、37℃诱导4h。重组表达的US9蛋白分子量约为20ku,且能被His标签抗体特异性识别。随后,利用纯化的US9重组蛋白作为免疫原成功制备了效价高达1∶64000~1∶128000的多克隆抗体,且该抗体能够与重组US9蛋白、293T细胞中过表达的US9蛋白以及PRV感染细胞中的US9蛋白发生特异性反应。综上,成功获得了高纯度PRV US9重组蛋白,并制备了具有高效价和良好特异性的多克隆抗体,可作为US9蛋白功能研究的重要检测工具。