基于SIRT3信号通路调控内皮功能探讨血府逐瘀汤对冠心病血瘀证模型大鼠的作用机制OA

目的:该研究旨在探讨线粒体去乙酰化酶3(SIRT3)在冠心病血瘀证模型大鼠心肌及内皮功能修复中的作用机制及血府逐瘀汤的干预作用。方法:90只SPF级雄性SD大鼠(造模后死亡16只,存活74只)随机分为正常组10只,假手术组(只穿线不结扎)10只,模型组10只,地尔硫䓬组(16 mg·kg^(-1))11只,血府逐瘀汤低、中、高剂量组(3.51、7.02、14.04 g·kg^(-1))各11只。大鼠冠心病血瘀证模型选用冠状动脉左前降支结扎术,术后连续干预7 d。观察大鼠的宏观表征,检测心电图、心脏彩超、血液流变学等指标;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织的病理形态学;比色法检测血清中一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮缩血管肽-1(ET-1)含量;免疫组化法检测心肌组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、6-磷酸果糖-2-激酶3(PFKFB3)蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌组织SIRT3、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、β-连环蛋白(β-catenin)和mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠整体状态较差,血瘀证候明显;HE染色心肌组织结构破坏明显,心肌细胞排列紊乱,部分肌纤维断裂、变性,胞核固缩或消失,间质水肿伴大量中性粒细胞浸润;心电图ST段持续性抬高,部分出现异常Q波,R波振幅降低,R-R间期不规则,T波高尖或倒置;左心室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)显著降低(P<0.01),左心室舒张末期内径(LVIDd)和左心室收缩末期内径(LVIDs)显著升高(P<0.01);低、中、高切全血黏度、血浆黏度及纤维蛋白原显著升高(P<0.01);血清中NO、eNOS含量显著降低(P<0.01),iNOS、ET-1含量显著升高(P<0.01);心肌组织的HIF-1α、PFKFB3蛋白表达显著升高(P<0.01);心肌组织SIRT3、PPARγ的蛋白表达水平和mRNA表达均显著降低(P<0.01),β-catenin的蛋白表达水平和mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,血府逐瘀汤中、高剂量组大鼠的一般情况及心电图结果有较好改善,HE染色的心肌细胞形态结构破坏有所改善,炎症浸润减少,LVIDd显著降低(P<0.01),全血低切黏度显著降低(P<0.01),血清中eNOS含量显著升高(P<0.01),iNOS含量显著降低(P<0.01),心肌组织的PFKFB3蛋白表达显著上升(P<0.01),心肌组织的SIRT3、PPARγ蛋白表达和mRNA水平均显著升高(P<0.01),β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.01);血府逐瘀汤低、中、高剂量组LVEF、LVFS明显升高(P<0.05,P<0.01),LVIDs显著降低(P<0.01),全血中、高切黏度、血浆黏度及纤维蛋白原均显著降低(P<0.01),NO含量显著升高(P<0.01),ET-1含量显著降低(P<0.01),心肌组织的HIF-1α蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),β-catenin的mRNA水平显著降低(P<0.01)。结论:血府逐瘀汤可能通过激活SIRT3信号通路,协同调控HIF-1α、PFKFB3、PPARγ、β-catenin等关键蛋白的表达,从代谢稳态、细胞连接稳定及血管舒缩协调等多方面调节内皮功能,从而促进冠心病血瘀证大鼠心肌的修复与功能改善。