基于网络药理学和代谢组学探讨活心丸稳定动脉粥样硬化易损斑块的作用机制OA

目的:基于网络药理学、非靶向代谢组学结合动物模型共同探讨活心丸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块的稳定作用及分子作用机制。方法:将40只SPF级雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠高脂饲料诱导12周建立AS模型,随机分为模型组、阿托伐他汀组(2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、活心丸低剂量组(18.2 mg·kg^(-1)·d^(-1))、活心丸高剂量组(36.4 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组。模型组与正常组每日灌胃等体积生理盐水,各给药组灌胃相应剂量的药物,干预持续8周后,超声检测主动脉、颈动脉血管舒缩内径差值(Dd-Ds)和脉搏波速度(PWV);生化检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;通过苏木素-伊红(HE)、油红O、马松(Masson)及免疫组化染色评估主动脉根部斑块面积、脂质、胶原、巨噬细胞(CD68)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,并计算斑块易损指数(VI);另对肝脏进行油红O染色观察脂质沉积并测定肝脏TC含量。基于网络药理学进行药物-疾病核心靶点的预测分析,并运用非靶向代谢组学技术鉴定关键差异代谢物及其相关通路;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肝脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)、磷酸化核转录因子-κB p65亚基(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、IL-6蛋白与mRNA的表达。结果:体内动物实验结果显示,活心丸可降低ApoE-/-小鼠主动脉弓的PWV值(P<0.05),增加主动脉Dd-Ds值(P<0.05),有效改善血管弹性功能、降低动脉僵硬度;还可减少主动脉弓脂质斑块面积占比(P<0.01),减少肝脏脂质沉积(P<0.01);减少斑块脂质含量及巨噬细胞浸润(P<0.05),提升胶原沉积及平滑肌细胞含量(P<0.05),降低斑块VI(P<0.01),并调节血脂水平(P<0.05)。整合代谢组学与网络药理学分析揭示,活心丸通过激活PPARγ核受体,上调PPARγ/LXRα/ABCA1/ABCG1信号通路的表达,从而促进巨噬细胞胆固醇外排,抑制NF-κB/IL-6炎症表达,最终发挥稳定AS易损斑块的药理作用;Western blot和Real-time PCR结果显示活心丸可上调ApoE-/-小鼠肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1及ABCG1的蛋白与mRNA表达(P<0.05),并下调NF-κB及IL-6的表达水平(P<0.05)。结论:活心丸可能通过调控PPARγ/LXRα/ABCA1/ABCG1信号通路并抑制炎症,减少斑块内脂质沉积与巨噬细胞浸润,从而增强AS易损斑块的稳定性。