基于JAK2/STAT3信号通路探讨抵当汤对脑梗死瘀热证大鼠小胶质细胞焦亡的影响OA

目的:探讨抵当汤调控Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路对小胶质细胞焦亡及脑梗死瘀热证的影响。方法:60只大鼠随机分为假手术组,模型组,抵当汤低、中、高剂量组(0.95、1.89、3.78 g·kg^(-1))及依达拉奉组(3.20 mg·kg^(-1)),每组10只,除假手术组外采用大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)联合腹腔注射角叉菜胶(50 mg·kg^(-1))3 d及皮下干酵母注射法(10 mL·kg^(-1))1 d构建脑梗死瘀热证模型,24 h后中药组灌胃给药,依达拉奉组腹腔注射给药,持续7 d。采用改良神经功能评分法(mNSS)评估神经功能缺损;2,3,5-三苯基四氮唑氯化物染色(TTC)测量脑梗死体积;血液流变学检测全血及血浆黏度。另将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、抵当汤高剂量组和AG490组(5 mg·kg^(-1)),每组9只,造模及中药组给药方法同前,AG490组腹腔注射给药,持续7 d。采用苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察脑组织病理形态;蛋白免疫印记法(Western blot)检测JAK2/STAT3信号通路及焦亡相关蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测焦亡相关mRNA水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫荧光(IF)染色检测离子钙结合适配器分子-1(Iba-1)、焦孔素D(GSDMD)共表达;透射电镜观察小胶质细胞膜孔洞形成。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、全血高、中、低切及血浆黏度、焦亡相关蛋白及mRNA表达、JAK2/STAT3通路磷酸化水平、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α水平、Iba-1及GSDMD荧光面积、细胞焦亡率、小胶质细胞膜孔数量均显著升高(P<0.01);缺血侧脑组织病理结构及神经元存活情况显著恶化。与模型组比较,抵当汤高剂量组上述各项指标均明显下降(P<0.05,P<0.01);脑组织病理损伤及神经元存活情况显著改善,且效果优于抵当汤中、低剂量组。结论:JAK2/STAT3信号通路能够参与调控NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的小胶质细胞焦亡,抵当汤可通过抑制该通路活化,减轻小胶质细胞焦亡,发挥对脑梗死瘀热证的神经保护作用。