基于肠道菌群调控PC介导胆固醇逆向转运途径探讨加味香砂六君子汤防治血脂异常的作用OA

目的 探讨加味香砂六君子汤基于肠道菌群调控磷脂酰胆碱(PC)介导胆固醇逆向转运(RCT)途径防治血脂异常的分子机制.方法 临床试验:研究对象来自辽宁中医药大学附属医院门诊部及住院部,于2019年2月至2020年3月期间收集脾虚血脂异常人群31例,健康人群40例,其中脾虚血脂异常人群予以加味香砂六君子汤治疗,疗程8周.采用全自动生化分析仪检测健康人群、脾虚血脂异常人群治疗前后血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;RT-qPCR法检测粪便中嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila)、哈氏梭菌(Clostridium hathewayi)、Prevotella ruminicola 等菌的绝对丰度;LC/MS 技术检测血浆PC水平;ELISA法检测血清载脂蛋白AⅠ(ApoA-Ⅰ)、ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP)水平.动物实验:15只无菌小鼠随机分为对照组、模型组和中药组,每组5只.对照组灌胃给予健康人群粪便菌液,模型组和中药组灌胃给予脾虚血脂异常人群粪便菌液,每天1次,连续1周,同时喂养高脂饲料.第5周开始,中药组灌胃给予加味香砂六君子汤,其余2组灌胃给予等量蒸馏水,每天1次,连续4周,且各组维持高脂饲料.采用全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;采用HE和油红O染色观察肝组织病理形态改变;ELISA法检测血清LCAT、ApoA-Ⅰ水平;LC/MS技术检测血浆PC水平;RT-qPCR法及Western blot法检测腹腔巨噬细胞ABCA1、ABCG1、ApoA-Ⅰ mRNA和蛋白表达,以及肝组织LCAT、ApoA-Ⅰ、低密度脂蛋白受体(LDL-R)、清道夫受体B1(SR-B1)mRNA和蛋白表达.结果 临床试验:与健康人群比较,脾虚血脂异常人群血清TC、TG、LDL-C、CETP水平升高(P＜0.01),HDL-C、ApoA-Ⅰ、ABC A1、LCAT水平降低(P＜0.01);肠道 Clostridium hathewayi 绝对丰度升高(P＜0.05),Akkermansia muciniphila 绝对丰度降低(P＜0.05);血浆PC水平降低(P＜0.05).经加味香砂六君子汤治疗后,脾虚血脂异常人群血清TC、TG、LDL-C、CETP水平降低(P＜0.01),HDL-C、ApoA-Ⅰ、ABCA1、LCAT 水平升高(P＜0.01);肠道 Clostridium hathewayi 绝对丰度降低(P＜0.05),Akkermansia muciniphila绝对丰度升高(P＜0.05);血浆PC水平升高(P＜0.05).动物实验:与对照组比较,模型组小鼠血清 TC、LDL-C 水平升高(P＜0.05,P＜0.01),HDL-C、LCAT、ApoA-Ⅰ 水平降低(P＜0.05,P＜0.01);肝组织病理改变程度及脂质沉积情况严重;肝组织TC、TG水平升高(P＜0.05,P＜0.01);血浆PC水平降低(P＜0.01);腹腔巨噬细胞 ABCA1、ABCG1、ApoA-Ⅰ 及肝组织 ApoA-Ⅰ、LCAT、LDL-R、SR-B1 mRNA 和蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,中药组小鼠血清TC、LDL-C水平降低(P＜0.05,P＜0.01),HDL-C、LCAT、ApoA-Ⅰ水平升高(P＜0.01);肝组织病理改变程度及脂质沉积情况明显改善;肝组织TC、TG水平降低(P＜0.05);血浆PC水平升高(P＜0.01);腹腔巨噬细胞 ABCA1、ABCG1、ApoA-Ⅰ 及肝组织 ApoA-Ⅰ、LCAT、LDL-R、SR-B1 mRNA 和蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 加味香砂六君子汤可能通过肠道菌群调控PC介导胆固醇逆向转运途径改善血脂异常.