菜心茎尖原生质体酶解体系构建OA
Construction of Enzymatic Hydrolysis System for Protoplasts of Flowering Chinese Cabbage Stem Tip
优化果胶酶、纤维素酶、离析酶含量和酶解时间,建立适用于菜心茎尖原生质体制备的方法,以期为菜心茎尖单细胞转录组测序提供可靠细胞来源.实验结果表明,纤维素酶、果胶酶、离析酶的质量分数分别为 1.50%,0.50%,0.60%组合,酶解2 h 可获得最佳的菜心茎尖原生质体产量和活性.进一步验证表明,该体系在菜心不同发育时期茎尖的原生质体分离中均表现出良好的适用性.原生质体产量分别为 2.90×107,2.62×107,2.47×107 个/g,活性比例均高于 92%.所获得的原生质体数量及活性均达到单细胞转录组测序的严格标准,表明该酶解体系可为菜心茎尖单细胞研究提供高质量的细胞样本.
To provide a reliable cell source for single-cell transcriptome sequencing of flowering Chinese cabbage stem tips,we optimized the concentrations of pectinase,cellulase,and macerozyme,as well as the enzymatic digestion time,to establish a suitable method for protoplast preparation from stem tips.Experimental results demonstrated that the combination of 1.50%cellulase,0.50%pectinase,and 0.6%macerozyme under 2-hour enzymatic hydrolysis yielded optimal protoplast yield and viability from flowering Chinese cabbage stem tip.Further validation confirmed the system's broad applicability across different developmental stages of flowering Chinese cabbage,achieving protoplast yields of 2.90×107,2.62×107,2.47×107 pieces/g,respectively,with viability rates consistently exceeding 92%.Both the quantity and viability of obtained protoplasts met stringent criteria for single-cell transcriptome sequencing,indicating that this enzymatic system can provide high-quality cellular samples for single-cell studies on flowering Chinese cabbage stem tip.
林思敏;王锶珩;宴子巧;关雪怡;刘梓怡;何勤勤;黄新敏
广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000广东石油化工学院 生物与食品工程学院,广东 茂名 525000
农业科技
菜心原生质体酶解体系
flowering Chinese cabbageprotoplastenzymatic hydrolysis system
《广东石油化工学院学报》 2026 (3)
32-36,5
国家自然科学基金(32002028)广东省自然科学基金(2022A1515010647)广东石油化工学院大学生创新训练项目(S20221.1656104)
评论