猪源和猴源SLFN11蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备OA
Prokaryotic Expression of Swine and Monkey SLFN11 Proteins and Preparation of Their Polyclonal Antibodies
Schlafen 11(SLFN11)是一种干扰素刺激基因,在肿瘤发生和病毒感染等方面发挥重要调控作用,制备猪源、猴源SLFN11蛋白多克隆抗体,为探索SLFN11蛋白抗病毒功能及机制提供良好的种属特异性免疫学材料.用PCR扩增猪源及猴源SLFN11重组蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET28a(+)-SLFN11-His-Swine、pET28a(+)-SLFN11-His-Monkey,用原核表达系统诱导 SLFN11 重组蛋白,通过镍柱亲和层析法纯化SLFN11重组蛋白,经乳化后免疫新西兰大白兔,制备SLFN11重组蛋白兔多克隆抗体.经耳缘静脉采血并分离血清,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中SLFN11重组蛋白抗体滴度,Western blot、免疫荧光分析方法(IFA)鉴定该多克隆抗体的特异性.论文构建了 SLFN11原核表达质粒,用IPTG诱导、纯化获得了猪源、猴源SLFN11重组蛋白,免疫新西兰大白兔后,制备多克隆抗体,经ELISA测定抗体滴度分别达到1∶2 500 000和1∶500 000.Western blot试验结果证明制备的多克隆抗体可特异性识别猪源、猴源SLFN11重组蛋白,且IFA结果显示该兔多克隆抗体能与真核质粒表达的SLFN11蛋白发生特异性反应.通过原核表达系统获得猪源、猴源SLFN11重组蛋白,制备并鉴定了该重组蛋白多克隆抗体具有良好特异性,为SLFN11蛋白的生物学功能研究提供材料.
Schlafen 11(SLFN11)is an interferon-stimulated gene that plays important regulatory roles in tumorigenesis and viral infection.Polyclonal antibodies against swine and monkey SLFN11 proteins were generated to provide species-specific immunological tools for exploring the antiviral functions and mecha-nisms of the SLFN11 protein.The genes encoding swine and monkey SLFN11 proteins were amplified by PCR.Recombinant expression plasmids pET28a(+)-SLFN11-His-Swine and pET28a(+)-SLFN11-His-Monkey were constructed.The SLFN11 recombinant proteins were induced using a prokaryotic expression system and purified by Ni-NTA affinity chromatography.After emulsification,New Zealand White rabbits were immunized to generate rabbit polyclonal antibodies against the SLFN11 recombinant protein.Blood samples were collected from the marginal ear vein,and serum was separated.Enzyme-linked immunosor-bent assay(ELISA)was performed to detect the antibody titers against SLFN11 recombinant protein in the serum.The specificity of the polyclonal antibodies was characterized by Western blot and immunofluo-rescence assay(IFA).In this study,prokaryotic expression plasmids for SLFN11 were constructed.The swine and monkey recombinant SLFN11 proteins were obtained following induction with IPTG and purifi-cation.After immunizing New Zealand White rabbits,polyclonal antibodies were generated.ELISA analysis showed that the antibody titers reached 1∶2 500 000 and 1∶500 000,respectively.Western blot results confirmed that the generated polyclonal antibodies specifically recognized both swine and monkey SLFN11 recombinant proteins.Furthermore,IFA results indicated that the rabbit polyclonal antibodies specifically reacted with SLFN11 protein expressed from eukaryotic plasmids.In conclusion,swine and monkey SLFN11 recombinant proteins were successfully obtained using a prokaryotic expression system,and the polyclonal antibodies against these recombinant proteins were generated and demonstrated to have good specificity,providing tools for the study of the biological functions of the SLFN11 protein.
蔡茂;梁珺珹;张昂克;孙爱军;杜永坤;闫志伟;刘梗;王飞;王小格;尤龙琪;司煊瑛;李灏天;苑亚茹
河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046陕西省府谷县农业农村局动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719499河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心,河南郑州 450046||河南省动物生物制品工程研究中心,河南郑州 450046
农业科技
SFLN11蛋白原核表达多克隆抗体
SFLN11 proteinProkaryotic expressionPolyclonal antibodies
《动物医学进展》 2026 (8)
1-9,9
国家自然科学基金(31702217)河南省重大科技专项项目(221100110600)
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