四酶分步法制备蛹虫草多肽及其通过Nrf2通路缓解UVB氧化损伤的研究OA

为了优化基于酶解法的蛹虫草多肽(CMP)制备方法,并进一步揭示蛹虫草多肽的抗氧化活性和机制。本研究以蛹虫草提取虫草素后的剩余物为原料,采用碱提酸沉法提取蛹虫草蛋白,优化了蛹虫草多肽的复合酶解工艺。检测了不同质量浓度蛹虫草多肽及粗蛋白(0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,4.0 mg/mL)对DPPH、ABTS和·OH自由基的清除率。另外,将HaCaT细胞分别用0.5,1.0,2.0 mg/mL蛹虫草多肽预处理24 h,然后再用UVB照射24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力。DCFH-DA荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS)水平。按试剂盒说明书分别检测细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性以及MDA含量。采用Western blot测定细胞内Nrf2/Keap1通路活性。结果显示,蜗牛酶+胃蛋白酶+木瓜蛋白酶+碱性蛋白酶复合酶解的蛹虫草多肽指数为84.25%±6.15%,为最佳酶组合。蛹虫草多肽对DPPH、ABTS和·OH自由基的IC_(50)依次为1.67,3.02和1.49 mg/mL。与M组比较,CMP-L/M/H组和VC组的相对细胞活力升高,ROS相对荧光强度降低,SOD、CAT和GSH-Px活性升高,MDA含量降低,Nrf2(细胞核)蛋白水平升高,Keap1蛋白水平降低,且有剂量依赖性(P<0.05)。本研究优化的四酶分步酶解工艺可高效制备蛹虫草多肽,该多肽通过直接清除自由基及激活Nrf2/Keap1通路增强细胞内源性抗氧化能力,从而缓解UVB诱导的HaCaT细胞氧化损伤。