龙胆酸调控miR-26b-5p/HIPK2轴对类风湿关节炎滑膜细胞增殖、凋亡的影响及机制OA

目的:探究龙胆酸(GA)调控miR-26b-5p/同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)轴对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:将MH7A细胞随机分为MH7A组和TNF-α处理组,TNF-α处理组细胞采用TNF-α处理24 h后使用不同浓度的GA(0~160 mmol//L)培养,检测细胞存活率,筛选最佳药物浓度,并随机分为TNF-α组、GA低浓度(GAL)组、GA高浓度(GA-H)组、GA-H+miR-26b-5p抑制剂阴性对照(GA-H+inhibitor-NC)组和GA-H+miR-26b-5p抑制剂(GA-H+miR-26b-5p inhibitor)组。qRT-PCR检测各组细胞中miR-26b-5p和HIPK2 mRNA水平;CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞培养体系中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平;双荧光素酶活性实验验证miR-26b-5p和HIPK2间的靶向关系。结果:相较于MH7A组,TNF-α组细胞中miR-26b-5p表达水平和细胞凋亡率降低(P<0.05),HIPK2 mRNA水平、细胞克隆形成数量、细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平升高(P<0.05);相较于TNF-α组,GA-L组和GA-H组细胞中miR-26b-5p表达水平和细胞凋亡率逐渐升高(P<0.05),HIPK2 mRNA水平、细胞克隆形成数量、细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平逐渐降低(P<0.05);miR-26b-5p inhibitor逆转了GA对TNF-α组MH7A细胞增殖、凋亡的影响;双荧光素酶活性实验验证了miR-26b-5p与HIPK2存在靶向关系(P<0.05)。结论:GA能够通过上调miR-26b-5p、下调HIPK2表达抑制RA滑膜细胞增殖,并促进其凋亡。