1株犬源多重耐药奇异变形杆菌的分离鉴定及生物学特性分析OA

【目的】研究犬源奇异变形杆菌的生物学特性,为犬源奇异变形杆菌防控提供理论基础。【方法】采集疑似泌尿道感染犬尿液,接种SS培养基进行初筛,通过革兰染色、生化鉴定及16S rRNA、atpD基因系统发育分析鉴定菌种,采用结晶紫染色法检测分离菌株生物膜形成能力;采用纸片扩散法进行药敏试验,进一步通过PCR扩增检测耐药基因;利用Illumina测序注释分离菌株毒力基因和耐药基因;通过膀胱注射和腹腔攻毒试验检测分离株对小鼠尿路感染能力及半数致死量(LD50)。【结果】从犬尿液中分离出1株革兰阴性杆菌,其在SS培养基上呈现中心黑色、边缘透明的圆形菌落;生化鉴定结果显示,分离菌株硫化氢、半乳糖、硝酸盐、3%H2O2、尿素酶、葡萄糖、鸟氨酸脱氢酶生化反应为阳性,氧化酶、蔗糖、蛋白胨水、甘露醇、果糖、山梨醇、七叶苷、Korser氏枸橼酸盐、阿拉伯糖生化结果为阴性;16S rRNA和atpD基因扩增序列比对显示,其与NCBI数据库中奇异变形杆菌相似性均为100%,进而鉴定分离菌株为奇异变形杆菌,命名为PM_YS_03。基于16S rRNA和atpD基因发育树分析显示,分离菌株与GenBank中人血液来源奇异变形杆菌XH983处于同一分支。生物膜检测结果显示,分离菌株具有生物膜形成能力,且为极强黏附型;药敏试验结果表明,该分离菌株对β-内酰胺类(氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢克肟、头孢吡肟、拉氧头孢、氨曲南、亚胺培南)、氨基糖苷类(妥布霉素、卡那霉素、链霉素)、四环素类(多西环素、米诺环素)、大环内酯类(阿奇霉素)及酰胺醇类(氯霉素)共15种抗菌药物表现耐药,仅对头孢曲松、环丙沙星、氧氟沙星表现敏感,具有多重耐药性;分离菌株携带acc(6'')-Ⅰb、gyrA、sul1、qnrD耐药基因。全基因组测序注释结果显示,分离株基因组总长度为4015036 bp,GC含量为40.75%,具有多种毒力基因及耐药基因。致病性试验结果显示,分离菌株可导致小鼠尿路感染,表现红肿、排尿困难及腹泻症状;分离株对小鼠的LD50为3.0×10^(7) CFU。【结论】本研究从疑似泌尿道感染犬尿液中分离获得1株多重耐药奇异变形杆菌,其具有形成极强生物膜黏附能力,携带多种毒力基因与耐药基因,具有尿路感染能力。本研究结果为后续犬源奇异变形杆菌的防治提供了重要参考。