PARP1在过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞DNA损伤和衰老中的作用研究OA

目的探究多聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)对氧化损伤环境下晶状体上皮细胞(LECs)DNA损伤和细胞衰老的影响。方法以SRA01/04细胞与年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜上皮细胞为研究对象,将SRA01/04分为细胞对照组(仅正常培养)、H_(2)O_(2)组(400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)干预)、H_(2)O_(2)+HA组(HA转染质粒+400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)干预)以及H_(2)O_(2)+OV-PARP1组(PARP1过表达转染质粒+400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预)。ARC患者与同期住院接受透明晶状体摘除术的黄斑前膜患者分别设为ARC组与对照组。Western blot检测各组细胞及患者晶状体前囊膜上皮细胞中PARP1的蛋白表达水平,以及各组细胞中DNA损伤标志物磷酸化组蛋白H_(2)A(γ-H_(2)A)、衰老相关标志物(p53、p21以及p16)和凋亡相关蛋白(Bcl-2与Bax)表达情况;SA-β-gal染色检测各组细胞及患者晶状体前囊膜上皮细胞衰老情况;免疫荧光法检测各组细胞线粒体DNA(mtDNA)表达水平;CCK-8检测各组细胞活力;JC-1染色检测各组细胞线粒体膜电位(MMP)水平变化。结果对照组与ARC组患者前囊膜上皮细胞中PARP1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.03与0.74±0.04,SA-β-gal染色阳性率分别为(10.98±3.68)%与(57.68±3.15)%,细胞对照组与H_(2)O_(2)组细胞中PARP1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.03与0.69±0.03,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与细胞对照组相比,H_(2)O_(2)+OV-PARP1组细胞中PARP1蛋白相对表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.001)。与H_(2)O_(2)+HA组相比,H_(2)O_(2)+OV-PARP1组细胞活力增加,差异有统计学意义(P<0.001)。与H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+HA组相比,H_(2)O_(2)+OV-PARP1组细胞中γ-H_(2)A蛋白相对表达水平和荧光强度均下降,mtDNA蛋白相对表达量和免疫荧光强度均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与H_(2)O_(2)+HA组相比,H_(2)O_(2)+OV-PARP1组细胞中p53、p21以及p16衰老相关蛋白相对表达水平以及细胞染色阳性率、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平、MMP水平均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论PARP1可促进细胞内损伤的DNA修复,稳定线粒体膜电位,抑制LECs的衰老与凋亡。