视网膜色素上皮细胞特异性极低密度脂蛋白受体基因敲除小鼠模型的构建及其模拟效果分析OA

目的构建视网膜色素上皮(RPE)细胞特异性极低密度脂蛋白受体(VLDLR)基因敲除小鼠模型,评估其模拟湿性年龄相关性黄斑变性脉络膜新生血管(CNV)及视网膜下纤维化的效果。方法通过Best1-Cre工具鼠与VLDLRf/f小鼠交配,构建RPE细胞特异性VLDLR基因敲除小鼠模型(实验组),以同窝VLDLRf/f小鼠为对照组,每组均为33只小鼠(66眼)。采用眼底照相、荧光素眼底血管造影及小动物频域OCT动态观察小鼠视网膜病变;RPE-脉络膜复合体铺片异凝集素B4染色评估血管形态;胶原杂交肽(CHP)染色和Western blot检测COL1A1蛋白评估视网膜下纤维化程度;Western blot检测LRP6及Non-p-β-Catenin蛋白相对表达量,流式细胞术检测RPE细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶阳性细胞数的百分比。结果实验组小鼠视网膜呈进行性病变,小鼠1月龄眼底出现色素紊乱及荧光渗漏,2-6月龄渗漏增多,8-10月龄渗漏减少伴瘢痕形成;OCT结果显示2月龄出现视网膜下高反射物质沉积及新生血管芽,8-10月龄新生血管芽消失、RPE结构紊乱;RPE-脉络膜复合体铺片异凝集素B4染色显示,4月龄RPE-脉络膜复合体出现大量异常红色荧光信号,8-10月龄逐渐减弱并消退;CHP染色显示,对照组小鼠CHP信号微弱;实验组小鼠在4月龄时即出现少量CHP高荧光信号,8-10月龄时高荧光信号显著增多,表现为RPE层局部无定形团块状沉积。10月龄时,实验组小鼠RPE-脉络膜复合体LRP6及Non-p-β-Catenin蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,实验组小鼠RPE细胞中β-半乳糖苷酶阳性细胞数百分比高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功构建了RPE细胞特异性VLDLR基因敲除小鼠模型,该模型能够成功模拟脉络膜来源的CNV及晚期视网膜下纤维化,为湿性年龄相关性黄斑变性的全病程研究提供了新的实验工具。