棉籽糖通过调节氧化应激缓解黄曲霉毒素B 1诱导的小鼠肾脏组织铁死亡和凋亡OA

本研究旨在探讨棉籽糖(Raf)对黄曲霉毒素B 1(AFB 1)诱导的小鼠肾脏损伤的保护作用及其潜在分子机制,为畜禽营养健康保障及功能性饲料添加剂研发提供新方案。选用30只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用随机分配法分为5组(每组6只),分别进行如下处理:Control组,不给予Raf和AFB 1;Raf组,给予50 mg/kg BW Raf;AFB 1组,给予1.5 mg/kg BW AFB 1;低剂量Raf干预组,给予25 mg/kg BW Raf+1.5 mg/kg BW AFB 1;高剂量Raf干预组,给予50 mg/kg BW Raf+1.5 mg/kg BW AFB 1。小鼠每隔1 d灌胃1次,为期30 d,共灌胃15次。灌胃期结束后采集所有小鼠的血液样本,实施安乐死并立即获取肾脏组织,进行生化指标检测、组织切片观察、相关蛋白表达检测。结果显示:1)Raf干预后,AFB 1诱导的小鼠血清中肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)含量显著升高的趋势被抑制(P<0.001或P<0.0001);且肾脏组织苏木精-伊红(HE)染色切片观察及Paller评分显示,AFB 1组出现炎性细胞浸润、出血、肾小管结构异常及肾小球细胞增生,Paller评分显著升高(P<0.0001),Raf干预后上述病理损伤得到改善,Paller评分显著降低(P<0.0001)。2)Raf可显著逆转AFB 1诱导的小鼠血清中谷胱甘肽(GSH)含量降低(P<0.05)、肾脏组织中丙二醛(MDA)含量升高(P<0.0001)以及活性氧(ROS)荧光强度升高的现象。3)肾脏组织TUNEL染色及蛋白质印迹(Western Blot)结果表明,Raf能减少AFB 1诱导的肾脏组织凋亡细胞数量,显著上调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(P<0.001)及显著下调Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达(P<0.0001)。4)与AFB 1组相比,高剂量Raf可显著上调肾脏组织中胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁死亡抑制蛋白1(FSP1)、铁蛋白重链1(FTH1)蛋白表达(P<0.001),且显著抑制AFB 1诱导的小鼠血清中亚铁离子(Fe^(2+))浓度的升高(P<0.01)。5)Raf可显著抑制AFB 1诱导的肾脏组织中Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)蛋白表达的下调(P<0.001或P<0.0001)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达的上调(P<0.0001)。综上所述,AFB 1可引发肾脏组织氧化应激失衡,激活细胞凋亡与铁死亡通路,最终导致小鼠肾脏功能损伤及肾脏组织病理改变;而Raf可改善AFB 1诱导的肾脏组织氧化应激、抑制细胞凋亡与铁死亡,对AFB 1诱导的小鼠肾脏损伤发挥保护作用。