反义lncRNA KRT-AS通过调控角蛋白基因表达促进糖尿病皮肤创面愈合OA

目的探讨反义长链非编码RNA(lncRNA)对角蛋白基因表达的调控和角质形成细胞功能的影响,并阐述其在糖尿病创面愈合中的作用。方法利用lncRNA芯片技术筛选糖尿病皮肤与正常皮肤差异表达的lncRNA,并通过cDNA末端快速扩增技术鉴定出一条由角蛋白基因反义链转录出的新型lncRNA KRT-AS。采用Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光检测lncRNA KRT-AS对角蛋白14(Krt14)表达的调控作用。通过CCK-8、流式细胞分析、划痕实验评估其对角质形成细胞增殖、细胞周期和迁移能力的影响。构建糖尿病大鼠皮肤创面模型,观察局部过表达lncRNA KRT-AS对大鼠创面愈合的促进作用。通过核糖核酸酶保护实验和α-鹅膏蕈碱阻断实验,探讨lncRNA KRT-AS对Krt14 mRNA表达调控的机制。结果芯片分析结果提示,lncRNA KRT-AS在糖尿病皮肤中下调最为显著,下调倍数达68.34倍。角质形成细胞敲低lncRNA KRT-AS可抑制Krt14的mRNA和蛋白表达,同时抑制细胞增殖和迁移能力,并将细胞周期阻滞于G0/G1期。动物实验证实,局部过表达lncRNA KRT-AS可促进糖尿病创面愈合,增加表皮厚度,并上调Krt14的表达。机制研究发现,lncRNA KRT-AS可与Krt14 mRNA形成RNA-RNA双链结构,保护mRNA免受降解,从而提高Krt14 mRNA的表达水平。结论LncRNA KRT-AS在糖尿病皮肤中表达下调。过表达lncRNA KRT-AS可通过增加Krt14 mRNA的稳定性,上调Krt14的表达,从而促进糖尿病创面愈合。LncRNA KRT-AS可作为糖尿病创面修复的潜在治疗靶点。