干扰LPAR2基因对织金白鹅骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响OA

【目的】探讨干扰溶血磷脂酸受体2基因(lysophosphatidic acid receptor 2,LPAR2)对织金白鹅骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)增殖和分化的影响,为鹅肌肉发育相关机制研究提供参考依据。【方法】选取5只3日龄织金白鹅提取SMSCs,通过实时荧光定量PCR检测LPAR2基因表达水平,比较不同siRNA的干扰效率;利用干扰效率最高的siRNA对LPAR2基因进行干扰,设置干扰组(si-LPAR2)和对照组(si-NC),检测LPAR2基因在SMSCs中的表达水平:通过CCK-8和EdU试验检测细胞不同生长时期(12、24、36和48 h)的增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测细胞增殖相关基因(PCNA、CCND1、CDK2)及分化相关基因(MyoD、MyoG、MyHC)的表达水平,并通过MyHC免疫荧光检测SMSCs分化状态。【结果】CCK-8结果显示,与对照组相比,干扰组细胞活性下降,且在36 h时显著降低(P<0.05)。EdU染色结果显示,与对照组相比,干扰组SMSCs增殖率极显著降低(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测显示,与对照组相比,SMSCs中PCNA、CCND1、CDK2基因表达水平极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),而MyHC基因表达水平显著升高(P<0.05)。MyHC蛋白免疫荧光结果显示,干扰组肌管分化更明显,表明LPAR2基因干扰可促进织金白鹅SMSCs分化。【结论】通过干扰LPAR2基因,可有效抑制织金白鹅SMSCs增殖并促进其分化。研究结果有利于探究鹅肌肉生长发育的分子基础,为家禽遗传育种研究提供了理论依据。