兰州某奶牛场肺炎克雷伯菌分离鉴定及致病性分析OA

【目的】以兰州某奶牛场奶牛乳房炎阳性乳样为研究样本,了解临床分离的肺炎克雷伯菌的耐药性与致病性,为后续肺炎克雷伯菌感染的临床防治提供参考。【方法】通过细菌分离、形态学鉴定和全基因组测序确定细菌基因型,采用肉汤微量稀释法检测其耐药性,并用纯化的菌液感染SPF级昆明小鼠,结合临床解剖和病理观察分析其对乳腺的致病性,使用实时荧光定量PCR和Western blotting检测相关炎症因子的表达水平,探究其潜在致病机制。【结果】分离菌呈γ-溶血,为革兰阴性短杆状,无芽孢和鞭毛,电镜观察部分菌体有荚膜。经16S rRNA基因测序结果显示,分离菌与肺炎克雷伯菌DSM 30104相似性高达99.37%,确定为肺炎克雷伯菌。药敏试验结果显示,分离菌对链霉素、头孢噻吩和氨苄西林耐药,对阿米卡星中介,对恩诺沙星、左氧氟沙星和庆大霉素敏感。全基因组测序结果显示,该菌基因组大小为5530063 bp,GC含量为57.23%。预测编码基因5070个,携带多种毒力因子和抗性基因。感染小鼠后发现小鼠乳腺组织出现充血、腺泡结构损坏和炎症细胞浸润,与对照组相比,乳房炎模型组小鼠乳腺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。【结论】该牛场乳房炎的发生与肺炎克雷伯菌感染相关,且病原菌具有一定的致病性和耐药性,提示该地区牛场应建立有效的诊断和治疗方案,有效防治肺炎克雷伯菌诱发的乳房炎。