NEK8在结肠癌中的表达与生物学功能及基于临床病理参数构建预后列线图预测模型OA

目的探讨NIMA相关激酶8(NEK8)在结肠癌中的表达、生物学功能及临床意义,基于多因素Cox回归分析筛选出的独立危险因素,构建并验证用于预测结肠癌患者总生存期(OS)的列线图预测模型。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载436例结肠癌患者的mRNA表达数据和相关临床病理资料。采用肿瘤免疫评估资源(TIMER)和阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析门户(Ualcan)数据库分析NEK8在结肠癌组织与癌旁正常结肠组织中的表达情况。通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)、Ualcan和Kaplan-Meier Plotter数据库分析NEK8 mRNA表达水平与结肠癌患者OS的关系。培养人结肠癌细胞系SW620、HCT8和人正常结肠黏膜细胞系NCM460,采用qRT-PCR法和蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中NEK8 mRNA和蛋白表达水平。使用小干扰RNA转染SW620和HCT8细胞,敲低NEK8基因,采用细胞计数试剂盒-8法、克隆形成实验、Transwell实验评估结肠癌细胞增殖和迁移能力。采用多因素Cox回归分析影响结肠癌预后的危险因素并构建与验证结肠癌患者预后列线图预测模型。采用ROC曲线、校准曲线和决策曲线分析评估列线图预测模型的预测效能和临床价值。通过基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析NEK8的生物学功能及信号通路。结果TIMER与Ualcan数据库分析显示结肠癌组织中NEK8 mRNA表达水平均高于癌旁正常结肠组织(均P<0.05)。GEPIA、Ualcan、Kaplan-Meier Plotter数据库均显示,NEK8高表达者OS均低于NEK8低表达者(均P<0.05)。qRT-PCR与Western blot法检测显示,SW620和HCT8细胞中NEK8 mRNA和蛋白表达水平均高于NCM460细胞(均P<0.01)。敲低NEK8后HCT8和SW620细胞增殖和迁移能力均明显下降。多因素Cox回归分析显示,高龄(≥65岁)、临床分期高(Ⅲ~Ⅳ期)、T分期高(T3~T4期)、有远处转移(M1期)、NEK8蛋白高表达均是影响结肠癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,列线图预测模型预测结肠癌患者1、3和5年总生存率的AUC分别为0.735、0.782和0.791,其预测OS的一致性指数为0.735。GO功能富集分析表明,NEK8主要富集于白细胞趋化性作用、防御反应的正向调节、细胞趋化性作用等。KEGG信号通路富集分析显示,NEK8主要富集于白细胞介素-17信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、肿瘤坏死因子信号通路等。结论NEK8在结肠癌组织中呈高表达,可促进结肠癌细胞增殖与侵袭,且对结肠癌患者的预后评估具有重要临床意义。