三桑小方水煎液HPLC指纹图谱及多指标成分定量研究OA

目的建立21批三桑小方水煎液的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)指纹图谱及9种成分的含量测定方法,为三桑小方的质量控制和临床合理应用提供参考。方法采用ZORBAX Extend-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱;进样量为5μL,检测波长280 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL·min^(-1)。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》对21批次三桑小方水煎液建立指纹图谱,基于指纹图谱相似性评价结合聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析,同时测定新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、东莨菪内酯、氧化白藜芦醇、芦丁、紫云英苷等9个成分的含量。结果建立的HPLC指纹图谱方法符合方法学要求,21批三桑小方水煎液有16个共有峰,相似度均大于0.900(第19批除外)。经对照品比对指认了新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、东莨菪内酯、氧化白藜芦醇、芦丁、紫云英苷共9个成分。CA和PCA把样品分为三类,结合OPLS-DA筛选出导致各批次之间产生差异的9个差异性标志物,分别为8、1、4(绿原酸)、9、6(咖啡酸)、5(隐绿原酸)、3(桑皮苷A)、14(紫云英苷)、2(新绿原酸)号色谱峰。新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、东莨菪内酯、氧化白藜芦醇、芦丁、紫云英苷含量测定方法的平均加样回收率分别为97.51%、99.32%、98.05%、100.14%、99.15%、98.62%、100.11%、98.77%、100.75%,RSD值分别为1.96%、1.85%、1.32%、1.82%、2.42%、1.79%、1.79%、2.07%、1.58%(n=6),9种成分线性关系良好(r≥0.9996),精密度、稳定性、重复性良好。含量测定结果分别为0.2401~0.2944、0.0814~0.1650、0.2021~0.4701、0.1311~0.1917、0.0100~0.0144、0.0934~0.1266、0.0235~0.0351、0.1277~0.1760、0.0346~0.0505 mg·mL^(-1)。结论所建立的HPLC指纹图谱和9个成分的含量测定方法具有良好的灵敏度、重复性和稳定性,可为三桑小方水煎液的质量控制和临床安全应用提供科学依据。