基于网络药理学及实验验证探讨丹白颗粒对盆腔炎性疾病后遗症的镇痛作用机制OA

目的基于网络药理学、体内外实验探讨丹白颗粒对盆腔炎性疾病后遗症(sequelae of pelvic inflammatory disease,SPID)的镇痛作用机制。方法运用网络药理学及分子对接预测丹白颗粒活性成分、靶点及关键通路。将SD大鼠分为假手术组、丹白颗粒高剂量假手术组、模型组和丹白颗粒低、中、高剂量组;采用Philips评分等方法评估子宫炎症;Von-Frey和热板实验检测大鼠疼痛阈值;ELISA、免疫荧光和Western blot检测脊髓背角内疼痛标志物、炎症及铁死亡相关指标的表达。采用铁死亡诱导剂(erastin,Era)处理SHSY5Y细胞构建铁死亡模型,给予丹白颗粒含药血清及铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1);CCK-8检测细胞存活率;ELISA和Western blot检测细胞内疼痛标志物、炎症及铁死亡相关指标的表达。结果丹白颗粒治疗SPID的关键通路涉及铁死亡、炎症介质对TRP通道的调节等;分子对接显示活性成分与靶点间结合力较强。体内实验结果显示,丹白颗粒明显改善SPID大鼠的子宫炎症,恢复疼痛阈值,下调脊髓背角内疼痛标志物COX-2、SP、CGRP、PGE2、瞬时受体电位A1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1),炎症相关指标IL-1β、TNF-α、GFAP、IBA1、p-NF-κB p65及铁死亡指标ROS、MDA、ACSL4的表达;上调抗炎因子IL-4、IL-10及铁死亡指标SOD、GSH、Nrf2、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表达。体外实验结果显示,丹白颗粒含药血清与Fer-1均能有效改善细胞铁死亡。结论丹白颗粒可能通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4轴,抑制脊髓背角神经元铁死亡,阻断TRPA1通道激活,并抑制NF-κB信号通路及胶质细胞活化,降低促炎因子水平,从而逆转“铁死亡-炎症-痛觉敏化”恶性循环,缓解SPID的疼痛。