当归红芪超滤物改善X射线诱导的HUVECs衰老的作用机制OA

目的探究当归红芪超滤物(Radix Angelicae sinensis and Radix Hedysari ultrafilter,RAS-RH)对X射线诱导衰老的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的改善作用,及其调控该细胞衰老过程的相关机制。方法体外培养HUVECs,用8 Gy X射线建立HUVECs衰老模型。设置空白组、模型组及RAS-RH低、中、高剂量组(100、200、400μg·L-1)。CCK-8法评估细胞活力;β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测细胞衰老情况;流式细胞术分析细胞周期分布;ELISA检测衰老相关分泌表型(senescenceassociated secretory phenotype,SASP)相关因子,如白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、趋化生长因子(C-X-C motif chemokine ligand 1,CXCL-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)水平变化的表达水平;DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平;总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性检测试剂盒及MDA含量检测试剂盒检测T-SOD活力和MDA含量,Western blot法检测细胞内p53、p21、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、FoxO4蛋白的表达水平。结果与空白组相比,衰老模型组细胞SA-β-gal染色阳性率明显升高,p53、p21蛋白表达量也明显增加(P<0.01),由此证实衰老模型构建成功。与衰老模型组相比,经RAS-RH处理的各剂量组细胞活力呈现剂量依赖性提升趋势。具体表现为:衰老细胞阳性率显著降低,ROS与MDA水平明显下降,G1期细胞比例减少,SASP相关因子IL-6、TNF-α、MMP-1、CXCL-1的表达水平降低,p53、p21、FoxO4蛋白表达量降低;同时,T-SOD活力增强,磷酸化PI3K(p-PI3K)与PI3K的比值、磷酸化Akt(p-Akt)与Akt的比值升高。其中,高剂量RAS-RH干预组的效果最为明显。结论RAS-RH可以改善X射线诱导的HUVECs衰老,且作用呈现剂量依赖性特征,其机制可能与PI3K/Akt/FoxO4通路有关。