抗纤灵方调控Nrf2/GPX4通路改善慢性肾脏病肾纤维化的机制OA

目的研究抗纤灵方(KXL)对5/6肾切除大鼠及爱拉斯汀(Erastin)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)的保护作用。方法①体内实验:采用SPF级雄性SD大鼠构建5/6肾切除模型,造模成功后将大鼠分为假手术组,模型组,抗纤灵方低、高剂量(KXL-L、KXL-H)组及铁死亡抑制剂Ferrostation-1(Fer-1)组。其中KXL-L、KXL-H组每天分别以10.5 g/kg KXL、21 g/kg KXL灌胃,假手术组和模型组大鼠每天以等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,Fer-1组每天以1 mg/kg剂量Fer-1腹腔注射1次,共干预6周。干预结束后,检测大鼠血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,收集大鼠24 h尿液检测24 h尿蛋白(24 h-UPro),检测大鼠肾组织亚铁离子(Fe2+)水平。HE染色、马松(Masson)染色观察肾组织病变及纤维化程度。免疫荧光检测核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达。②体外实验:噻唑蓝(MTT)法测细胞活力,选出最佳KXL浓度。HK-2细胞分为正常组、Erastin组、Erastin+KXL组、Erastin+Fer-1组。检测各组谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+水平。Western blot法检测各组Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Nrf2、GPX4蛋白表达。结果①体内实验:与模型组相比,KXL-L、KXL-H组SCr、BUN、24 h-UPro及Fe2+水平降低,Nrf2、GPX4蛋白表达水平升高(P<0.01)。②体外实验:与Erastin组相比,Erastin+KXL组Nrf2、GPX4蛋白表达水平升高,Col-Ⅰ、α-SMA蛋白表达水平降低,MDA、Fe2+水平降低,GSH水平升高(P<0.01)。Fer-1的作用效果与KXL一致。结论KXL减轻肾纤维化,可能与调控Nrf2/GPX4信号通路抑制铁死亡有关。