血管生成素样蛋白8缺乏抑制AKT2/S6K信号通路和内质网应激进而减少MASLD小鼠肝脏脂质沉积OA

目的:探究血管生成素样蛋白8(angiopoietin-like protein 8,ANGPTL8)对代谢功能障碍相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease,MASLD)小鼠肝脏脂质沉积的影响,分析其对AKT2/核糖体蛋白S6激酶(ribosomal protein S6 kinase,S6K)信号通路及内质网应激的调控作用。方法:(1)选取8周龄C57BL/6野生型(wild-type,WT)小鼠和Angptl8全身敲除(Angptl8^(-/-))小鼠,给予正常饮食或高脂饮食(high-fat diet,HFD;诱导MASLD模型)喂养12周,每组8只。RT-qPCR和免疫组化染色检测小鼠肝脏ANGPTL8表达;HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏脂质沉积;测量小鼠体重、肝重及肝/体重比;进行葡萄糖耐量实验(glucose tolerance test,GTT)和胰岛素耐量实验(insulin tolerance test,ITT)并测定曲线下面积(area under the curve,AUC);检测小鼠肝组织丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。(2)体外实验中,通过慢病毒构建ANGPTL8敲减的HepG2细胞株;采用棕榈酸和油酸(palmitic acid and oleic acid,PO)联合诱导建立HepG2细胞脂质沉积模型。RT-qPCR检测PO诱导后HepG2细胞ANGPTL8的mRNA表达;油红O染色观察细胞脂质沉积;检测TG和TC含量;Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路及AKT2/S6K信号通路蛋白表达。结果:HFD组小鼠肝脏出现明显脂质沉积,ANGPTL8表达升高(P<0.01);与HFD喂养的WT小鼠相比,Angptl8^(-/-)组小鼠体重、肝重和肝/体重比降低,GTT-AUC和ITT-AUC减小(P<0.05),肝脏脂质沉积减轻,ALT、AST、TG、TC及MDA水平下降(P<0.05)。PO诱导的HepG2细胞脂质沉积增加并伴ANGPTL8的mRNA表达水平升高(P<0.01);敲减ANGPTL8导致PO诱导的HepG2细胞脂滴形成及TG和TC含量减少(P<0.05),同时PERK通路的激活被抑制,并降低AKT2/S6K蛋白及磷酸化蛋白水平(P<0.05)。结论:ANGPTL8缺失可减轻MASLD小鼠肝脏脂质沉积及HepG2细胞脂毒性,其作用可能与抑制AKT2/S6K信号通路和PERK介导的内质网应激有关。