安脑平冲方通过激活SIRT1/FOXO1信号通路减轻血红素诱导的原代神经元氧化应激损伤OA

目的:探讨安脑平冲方(Annao-Pingchong decoction,ANPCD)是否通过调控沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/叉头盒蛋白O1(forkhead box protein O1,FOXO1)通路减轻血红素诱导的原代神经元氧化应激损伤。方法:采用氯化血红素诱导原代神经元建立细胞氧化应激模型,根据实验需要分别联用空白血清、ANPCD含药血清、SIRT1抑制剂Ex-527等处理细胞。光学显微镜下观察神经元形态变化,CCK-8法检测细胞存活率;采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测氧化应激相关指标水平;免疫荧光染色法检测细胞SIRT1、FOXO1、SOD2和微管关联蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)蛋白表达;Western blot法检测细胞SIRT1、FOXO1、乙酰化FOXO1(acetylated FOXO1,Ac-FOXO1)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和SOD2蛋白表达。结果:与正常对照组相比,氯化血红素处理的模型组可见神经元数量明显减少,轴突及树突网络明显破坏,总SOD水平及SIRT1、FOXO1、SOD2、CAT和MAP2蛋白表达显著减少(P<0.01),ROS、MDA及Ac-FOXO1蛋白水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,ANPCD含药血清处理组神经元数量明显增多,轴突及树突网络较前丰富,总SOD水平及SIRT1、FOXO1、SOD2、CAT和MAP2蛋白表达显著增多(P<0.01),Ac-FOXO1蛋白、ROS及MDA水平显著降低(P<0.01);Ex-527抑制剂处理组神经元数量进一步减少,轴突及树突网络破坏更为严重,总SOD水平及SIRT1、FOXO1、SOD2、CAT和MAP2蛋白表达进一步减少(P<0.05),ROS、MDA及Ac-FOXO1蛋白水平进一步升高(P<0.05)。与Ex-527抑制剂组对比,抑制剂与ANPCD含药血清联合处理组可见活细胞增多,轴突及树突网络明显恢复,总SOD水平及SIRT1、FOXO1、SOD2、CAT和MAP2蛋白表达显著增多(P<0.01),Ac-FOXO1蛋白、ROS及MDA水平显著降低(P<0.01)。结论:ANPCD可能通过激活SIRT1/FOXO1通路减轻血红素诱导的原代神经元氧化应激损伤。