石吊兰总黄酮通过TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制细胞焦亡进而减轻DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎OA

目的:探究石吊兰总黄酮(total flavonoids of Lysionotus pauciflorus Maxim,LPMTF)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfatesodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的减轻作用。方法:将48只SPF级C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、LPMTF低剂量(82.2 mg·kg^(-1)·d^(-1))组、中剂量(164.4 mg·kg^(-1)·d^(-1))组、高剂量(328.8 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,及阳药(美沙拉嗪300 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,每组8只。其中,正常组小鼠每天自由饮用纯净水,连续10 d,其余各组自由饮用3%DSS溶液,连续7 d,其中各给药组在开始造模同时每天灌胃给药,连续10 d,正常组与模型组则每天给予等量蒸馏水,观察小鼠体重及疾病活动指数(disease activity index,DAI)变化,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)法观察小鼠结肠组织病理损伤情况,阿利新蓝-过碘酸-雪夫(Alcian blue-periodic acid-Schiff,AB-PAS)染色观察杯状细胞数量变化,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin^(-1)β,IL^(-1)β)和IL-6表达水平,免疫荧光法检测p-NF-κB p65的核转位情况,Western blot检测Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核因子κB p65亚基(nuclear factor kappa-B p65 subunit,NF-κB p65)、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)、含CARD结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、剪切型caspase-1(cleaved caspase-1)、消皮素D N端片段(gasdermin D N-terminal fragment,GSDMD-N)等相关蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,LPMTF各剂量组能够缓解小鼠体重减轻,降低小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分(P<0.05或P<0.01),使小鼠结肠长度恢复(P<0.05),能够减轻小鼠结肠病理损伤和炎症浸润(P<0.05)。ELISA结果表明,经LPMTF治疗后,小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。免疫荧光结果显示,相较于模型组,给药组NF-κB p65的核转位显著减弱(P<0.05),同时TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved caspase-1和GSDMD-N等蛋白的表达均下调(P<0.05或P<0.01)。结论:LPMTF能够通过TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制细胞焦亡进而减轻DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎。