珠子参总皂苷减轻糖尿病大鼠创面慢性炎症OA

目的:探索珠子参减轻糖尿病创面慢性炎症及免疫紊乱的物质基础及其作用机制。方法:通过UHPLC-Q Exactive鉴定珠子参总皂苷(total saponins of Rhizoma Panacis majoris,SRPM)成分,结合网络药理学和分子对接预测SRPM的潜在作用机制。链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,造模成功后随机分为模型(model,MOD)组、高剂量(200 mg/kg)SRPM内服治疗组和低剂量(100 mg/kg)SRPM内服治疗组,每组8只。灌胃治疗3周后,造直径2 cm的背部全层皮肤切除伤口,创面建模后,除继续灌胃干预外,SRPM组每只再外敷50μL的SRPM凝胶,正常和模型组外敷空白凝胶,每天1次,持续14 d。Luminex液相悬浮芯片技术靶向检测23个细胞因子的水平,筛选出组间差异蛋白并进行生物信息学分析。Western blot和RT-qPCR检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路上下游相关分子水平变化。结果:通过网络药理学预测出SRPM可能围绕炎症及免疫调节发挥治疗糖尿病创面的作用。分子对接显示,Degree值排名前6的关键靶点,与SRPM的36个化学成分均显示出良好的结合活性(结合能<−5 kcal/mol)。从糖尿病大鼠创缘组织中筛选出13个组间差异蛋白,分别为粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、调节激活正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation,normal T cell expressed and secreted,RANTES)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、IL-10、IL-1α、IL-5、巨噬细胞炎症蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和IL-4。其中,SRPM对比MOD获得差异蛋白7个,IL-1α、IL-1β、IL-6、MIP-1α、TNF-α和MCP-1表现为下调,IL-10表现为上调。Western blot和RT-qPCR结果显示,相比MOD组,SRPM大鼠创缘组织中Wnt1、β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达显著上调(P<0.01),GSK-3β表达显著下调(P<0.05或P<0.01);促凋亡蛋白胱天蛋白酶3(caspase-3)水平明显降低(P<0.01),抗凋亡蛋白B细胞白血病/淋巴瘤2(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)水平明显升高(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,SRPM组大鼠的细胞因子、Wnt/β-catenin通路水平以及创面愈合率之间具有显著相关性(P<0.05或P<0.01)。结论:SRPM可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路来抑制细胞凋亡,纠正细胞因子的失衡并综合调节免疫紊乱,从而有效减轻糖尿病大鼠创面过度炎症,发挥促愈作用。