外源性IL-33通过调控活化BV2小胶质细胞逆转其对PC12细胞生长抑制的作用研究OA

背景小胶质细胞-神经元相互作用对脊髓损伤后的神经修复至关重要。白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)是来自白细胞介素-1家族的多功能细胞因子,其在脊髓损伤后调节小胶质细胞-神经元相互作用中起关键作用。目的探究活化BV2细胞对PC12细胞生长的调控作用。方法使用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)检测不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预BV2细胞后BV2细胞活化个数及BV2细胞存活率,筛选影响其活化的最适浓度。利用免疫荧光染色检测BV2细胞突起长度及分支变化情况。将普通培养基培养的BV2细胞与含LPS培养基培养的BV2细胞分别与PC12细胞共培养,利用免疫荧光染色检测PC12细胞突起长度及分支变化情况。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素4(interleukin-4,IL-4),白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)基因相对表达量;使用10 ng/mL IL-33干预活化的BV2细胞,并将其与PC12细胞共培养,利用免疫荧光染色检测PC12细胞突起长度及分支变化情况。结果CCK8结果显示,当LPS浓度<1μg/mL时,细胞呈明显活化形态的个数较少,当LPS浓度>1μg/mL时,细胞存活率出现下降,所以1μg/mL为影响BV2细胞活化的最适浓度。光学显微镜观察及免疫荧光染色实验结果显示,相比于静息态BV2细胞,活化BV2细胞突起变短,胞体近端分支变多,形态呈现阿米巴样结构。RT-qPCR结果显示,促炎因子IL-6,TNF-α表达水平上调(P<0.01),而抗炎因子IL-4,IL-10的表达差异无统计学意义(P>0.05)。光学显微镜观察及免疫荧光染色结果显示,与活化BV2细胞共培养后,PC12细胞突起变短,分支变少;IL-33的干预减轻了这一现象。结论IL-33可以调控活化BV2细胞,减少其对PC12细胞生长的抑制作用。