基于网络药理学和实验验证探讨国医大师葛琳仪清肺止咳汤治疗咳嗽变异性哮喘的机制OA

[目的]基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)、网络药理学与动物实验,探索清肺止咳汤(Qingfei Zhike Decoction,QFZKD)治疗咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)的药效物质基础及可能的作用机制。[方法]采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定QFZKD主要活性成分,通过网络药理学构建“QFZKD-成分-靶点-CVA”调控网络和蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络。通过Cytoscape 3.8.2软件筛选QFZKD治疗CVA的主要活性成分和关键靶点,以富集分析预测作用机制,并进行分子对接。最后构建CVA小鼠模型,对预测的机制进行体内验证。[结果]UPLC-Q-TOF-MS共鉴定出QFZKD化学成分67种,筛选出具有潜在生物活性的成分18种,主要活性成分有西贝母碱、黄芩素和汉黄芩素等,对应271个QFZKD治疗CVA的靶点,核心作用靶点为TNF、丝氨酸/苏氨酸激酶1(serine/threonine kinase 1,AKT1)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶(Proto-oncogene tyrosine-protein kinase,SRC)等,潜在作用机制涉及对外源性刺激的反应、炎症反应以及蛋白质磷酸化等过程,与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)、缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)信号通路、Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路等相关。动物实验表明,与模型组比较,QFZKD给药组有效减轻CVA小鼠症状及肺组织损伤,抑制TLR4/髓系分化初级反应蛋白质88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的激活,显著降低炎症因子IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、IFN-γ、TNF、IL-12p70的水平,升高IL-10的水平,从而减轻气道炎症和气道高反应性。[结论]QFZKD通过多成分、多靶点、多通路协同治疗CVA,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。