基于METTL3介导的Rubicon m6A甲基化修饰探讨芪参汤通过促进自噬治疗非酒精性脂肪性肝病的机制研究OA

目的:探讨芪参汤对METTL3介导的Rubicon m6A甲基化的影响,从而阐明其调控自噬治疗非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子机制。方法:采用0.5 mmol/L游离脂肪酸处理AML-12肝细胞构建NAFLD模型。设置空白组、模型组、芪参汤含药血清组及芪参汤+METTL3过表达组。通过油红O染色、BDPY 493/503荧光染色及生化试剂盒检测细胞内脂质含量;Western blot检测自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62)及METTL3、Rubicon表达;mCherry-GFP-LC3慢病毒示踪检测自噬流;采用斑点杂交技术检测各组细胞总RNA中整体的m6A修饰水平。采用m6A甲基化RNA免疫共沉淀结合定量PCR(MeRIP-qPCR)技术检测特定靶基因Rubicon mRNA上的m6A修饰富集程度。结果:与空白组相比,模型组肝细胞脂质沉积(油红O积分光密度、甘油三酯、总胆固醇)明显增加(P<0.01),自噬流受阻(LC3-Ⅱ/Ⅰ与p62蛋白、自噬溶酶体明显减少)(P<0.01)。METTL3与Rubicon的蛋白及mRNA表达上调,Rubicon mRNA的m6A修饰水平升高(P<0.01)。芪参汤含药血清干预后,上述异常被明显逆转(P<0.01)。然而,过表达METTL3可部分抵消芪参汤的上述保护作用,包括逆转其对脂质沉积的改善、对自噬流的促进以及对Rubicon m6A修饰水平的下调效应(P<0.01)。结论:芪参汤可能通过抑制METTL3的表达,降低其对Rubicon mRNA的m6A甲基化修饰,恢复自噬通量,从而减轻肝细胞脂质沉积。