电针抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经功能、炎症及神经元坏死性凋亡的影响OA

目的:探究电针对缺血性脑卒中(CIS)大鼠神经功能、炎症、脑梗死体积、神经元病理损伤和坏死性凋亡的影响及受体相互作用蛋白激酶(RIPK) 1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)信号通路的调控作用。方法:将通过线栓法诱导大脑中动脉栓塞构建的72只CIS模型大鼠随机分成模型组、电针组、RIPK1激活剂组(8μg/kg)和电针+RIPK1激活剂组,18只/组;另取18只正常大鼠进行相同的手术过程,不插入线栓作为假手术组;各组给予相应干预7 d。用Zea-Longa评分法评估大鼠神经功能缺损情况;酶联免疫吸附法测定血清炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)]水平;2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积百分比;苏木素-伊红染色、透射电子显微镜分别观察缺血侧皮质区脑组织神经元病理学及超微结构变化;免疫荧光法检测缺血侧皮质区脑组织RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL(p-MLKL)阳性表达;蛋白质印迹法检测缺血侧皮质区脑组织RIPK1、RIPK3、MLKL和p-MLKL蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠缺血侧皮质区脑组织神经元排列较松散,可见坏死细胞、核变形和固缩、细胞水肿和空泡,神经元内质网严重液泡样变、肿胀,线粒体肿胀、嵴破裂或丢失,细胞膜不连续,细胞核变形,染色质浓缩,神经功能缺损评分、血清TNF-α、MCP-1、IL-1β、脑梗死体积百分比、缺血侧皮质区脑组织RIPK1、RIPK3和p-MLKL阳性表达、RIPK1、RIPK3蛋白表达和p-MLKL/MLKL蛋白比值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠缺血侧皮质区脑组织神经元排列、核变形和固缩、细胞水肿和空泡现象改善,坏死细胞的数量减少,神经元上述超微结构损伤明显减轻,神经功能缺损评分、血清TNF-α、MCP-1、IL-1β、脑梗死体积百分比、缺血侧皮质区脑组织RIPK1、RIPK3和p-MLKL阳性表达、RIPK1、RIPK3蛋白表达及p-MLKL/MLKL蛋白比值显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);RIPK1激活剂组大鼠缺血侧皮质区脑组织神经元排列、核变形和固缩、细胞水肿和空泡现象加重,坏死细胞的数量增多,神经元上述超微结构损伤明显加重,神经功能缺损评分、血清TNF-α、MCP-1、IL-1β、脑梗死体积百分比、缺血侧皮质区脑组织RIPK1、RIPK3和p-MLKL阳性表达、RIPK1、RIPK3蛋白表达及p-MLKL/MLKL蛋白比值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。电针+RIPK1激活剂组大鼠缺血侧皮质区脑组织神经元病理及超微结构损伤和上述定量指标较电针组恶化,较RIPK1激活剂组改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针可能通过抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路改善CIS大鼠神经功能及神经元病理损伤和坏死性凋亡,减少炎症反应和脑梗死体积。