黄芪—党参药对调控MAPK、TNF-α、NF-κB和PI3K/AKT信号通路干预肝纤维化的作用机制OA

目的探究黄芪—党参药对干预肝纤维化的作用靶点及作用机制。方法使用TCMSP和GeneCard等数据库获取药物和肝纤维化靶点,与黄芪—党参成分靶点交集后得到预测靶点,进而利用Cytoscape构建“药物—成分—靶点—疾病”网络,STRING数据库建立PPI网络,R软件进行GO和KEGG富集分析,并采用Autodock Tools完成分子对接验证。采用LX-2细胞构建肝纤维化星状细胞激活模型,并依次分为空白对照组、模型组[使用5ng/mL转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导]、黄芪组(TGF-β1诱导+黄芪提取物干预)、党参组(TGF-β1诱导+党参提取物干预)、黄芪—党参组(TGF-β1诱导+黄芪提取物联合党参提取物干预);Western blot法检测各组细胞外基质α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(DESMIN)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白相对表达水平。结果筛选得到黄芪有效成分20个、党参21个;黄芪对应靶点191个,党参对应靶点109个,黄芪—党参药对去除重复后共获得靶点218个;与肝纤维化疾病靶点取交集,得到核心靶点198个,关键靶点包括MAPK、TNF-α、NF-κB、PI3K、AKT等。GO功能富集分析共获得1043个条目,KEGG通路富集分析得到183条信号通路,其中显著富集的通路包括MAPK、TNF-α、NF-κB、PI3K、AKT信号通路。CCK-8检测结果表明,1.25μg/mL为黄芪、党参和黄芪—党参的最佳干预质量浓度;Western blot检测结果表明,黄芪、党参和黄芪—党参药对均能显著降低细胞外基质α-SMA、DESMIN、CollagenⅠ蛋白相对表达水平(P<0.05),以及TNF-α、NF-κB蛋白相对表达水平和p-MAPK/MAPK、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值(P<0.05);且黄芪—党参组降低程度较黄芪组、党参组更显著(P<0.05)。结论黄芪—党参药对通过抑制细胞外基质α-SMA、DESMIN、CollagenⅠ蛋白及MAPK、TNF-α、NF-κB和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达,延缓肝纤维化进展。