洋葱黄矮病毒RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用OA

为建立洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)的田间快速检测方法,通过筛选特异性扩增引物、设计探针建立基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合的可视化检测方法,并优化该方法的反应温度和反应时间,验证特异性和灵敏度以及田间样品适用性。结果表明:所建RPA-LFD可视化检测方法有效反应温度范围为38~46℃,最适反应温度为44℃,最短反应时间为6 min。特异性和灵敏度结果显示,该方法对OYDV具有高度特异性,与韭葱黄条病毒(leek yellow stripe virus,LYSV)、大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)和大蒜普通潜隐病毒(garlic common latent virus,GCLV)等9种常见葱属Allium作物病毒均无交叉反应;对OYDV外壳蛋白基因的检测下限可达10^(2) copies/μL,灵敏度为聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)的10倍,且可稳定用于田间样品中OYDV的准确检测。该方法操作简便,无需精密仪器与专业操作技能,适用于田间现场快速检测。